Fare Modelinden Sinoatriyal Düğüm İzolasyonu: Murin Kalbinden SA Düğümünü Hasat Etme Prosedürü

Özet

Kaynak: Kumar, P ve diğerleri, Farelerde İçsel Kardiyak Kalp Pili Yapma Kusurlarını Tanımlamak için Sinoatriyal Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelektrot Dizisi Kaydı. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, sinoatriyal düğümü veya SAN'ı fare kalbinden izole etme prosedürünü gösterir. SAN, spontan aksiyon potansiyelleri üreterek kalp atışını başlatan sinoatriyal hücreleri barındırır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Sinoatriyal düğümün (SAN) diseksiyonu

1. SAN diseksiyonu için heparinize Komple Tyrode solüsyonunu hazırlayın.
   1. 40 mL Complete Tyrode çözeltisine 400 μL heparin (1.000 USP / mL) ekleyin ve 37 ° C'lik bir su banyosunda ısıtın.
2. Fareye intraperitoneal olarak 200-300 μL heparin (1000 USP / mL) enjekte edin ve hayvanın 10 dakika oturmasına izin verin.
3. Heparinize fareyi aşırı dozda izofluran ile ötenazi yapın.
   1. Fareyi, delikli bir plastik tüp içindeki bir filtre kağıdına 200-300 μL sıvı izofluran eklenerek üretilen izofluran buharlarını içeren küçük bir cam hazneye yerleştirin.
      NOT: İzofluran cilt tahrişine neden olabileceğinden ve cilt yoluyla da emilebileceğinden, sıvı fareye doğrudan temas etmemelidir. Bu nedenle, izofluran ile ıslatılmış mendil, uygulama için delikli bir tüpe yerleştirilir.
   2. Hareketin ve nefes alma çabasının durması ve ayak parmağı kıstırma refleksinin olmaması ile ölümü doğrulayın. Ölüm genellikle odaya yerleştirildikten sonra yaklaşık 1-2 dakika sürer.
      not: Ölüme genellikle idrara çıkma eşlik eder.
4. Fareyi, pençeleri uzanmış bir diseksiyon tahtasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve 1 inç uzunluğunda, 23 gauge şırınga iğneleri kullanarak pençeleri tahtaya sabitleyin. Daha sonra cerrahi makas kullanarak ve kürkü köklerinden keserek göğüs kafesinin alt kısmına yakın bir yerde bulunan kürkü çıkarın.
   not: Bir diseksiyon tahtası için polistiren soğutucu kapaklar kullanılabilir.
5. Cildi bir kanama durdurucu ile tutarken, göğüs kafesinin hemen altındaki ciltte yaklaşık sol kostal arktan sağ kostal arkına kadar enine bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın (Şekil 1A).
6. Karın zarını cerrahi makasla kesin ve karaciğeri diyaframdan dikkatlice ayırın, karaciğeri çentiklememeye dikkat edin, bu aşırı kanamaya neden olacaktır (Şekil 1B). Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için diyaframı göğüs kafesi boyunca kesin (Şekil 1C-D).
7. Cerrahi makas kullanarak, kalbe zarar vermemeye dikkat ederek, kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesinin yan duvarlarını kostal kemerlerin kenarlarından köprücük kemiklerine kadar kesin (Şekil 1D). Ardından, göğüs kafesini omzun üzerinden sabitlemek için 23 gauge bir şırınga iğnesi kullanın, yerinde ve cerrahi alanın önünden uzak tutun.
8. Nemli tutmak için kalbin üzerine ılık (37 °C) heparinize Complete Tyrode solüsyonu damlatmak için bir transfer pipeti kullanın.
   not: Kalbin kurumasına izin vermeyin.
9. Akciğerleri ekstra ince Graefe forseps ile tutarak ve trakeayı cerrahi makasla keserek çıkarın (Şekil 1E).
10. Kalbin tepesini ekstra ince Graefe forseps ile tutun ve aort ve vena kavasını cerrahi makasla keserek çıkarın. Kalbi kürlenmiş silikon elastomer içeren bir Petri kabına aktarın (Şekil 2A) ve kalbi 2-3 mL ılık (37 ° C) heparinize Komple Tyrode çözeltisi ile yıkamak için bir transfer pipeti kullanın.
    not: SAN'ı içeren sağ kulakçıkların hassas arka duvarına ve bağlı sağ atriyal damarlara zarar vermemeye dikkat edin. Kalbi Complete Tyrode'un solüsyonu ile yıkamak, kalbin kurumasını önler, ancak diseksiyon sırasında görüşü bozacağı için kalbi solüsyona tamamen batırmaz.
11. Sağ atriyum deneycinin sağında ve sol atriyum deneycinin solunda olacak şekilde kalbi yönlendirin.
    not: İskemiye bağlı yaralanmayı önlemek için SAN dokusunun diseksiyonu hızlı bir şekilde yapılmalıdır.
12. Kalbin tepesini bir diseksiyon pimi ile tabağa tutturun. Daha sonra, inferior vena kavayı Dumont #2 laminektomi forseps ile tutarken, sağ atriyumdaki pozisyonlarını bulmak için inferior ve superior vena kavadan 22 G'lık bir şırınga iğnesi sokun, bu aynı zamanda SAN'ın yaklaşık pozisyonunu da tanımlar (inferior ve superior vena kava arasındaki doku yamasında bulunur (Şekil 2B).
13. Küçük diseksiyon pimleri kullanarak, sol ve sağ atriyal ekleri tabağa sabitleyin.
    1. Sol atriyal apendiks'i Dumont #2 laminektomi forsepsleri ile tutarken, yerinde tutmak için sol atriyal apendiksten bir diseksiyon pimi yerleştirin.
    2. Sağ atriyal apendiks'i Dumont #55 forseps ile tutarken, yerinde tutmak için sağ atriyal apendiksten bir diseksiyon pimi yerleştirin.
       not: İstenirse sol ve sağ atriyal uzantıları tutmak için aynı tip forseps kullanılabilir.
14. Vena kavasını kaplayan şırınga iğnesini çıkarın.
15. Kalpten kanı boşaltmak için, ventriküller boyunca enine bir kesi yaparak kalbin tepesini (yani alt yarısını) çıkarmak için Castroviejo makasını kullanın (Şekil 2C). Daha sonra kalbi ılık (37 °C) heparinize edilmiş Complete Tyrode solüsyonunu bir transfer pipeti ile ekleyerek yıkayın.
16. Atriyoventriküler septum boyunca kesmek için Castroviejo makası kullanın, insizyonu ventriküle kulakçıktan daha yakın tutun. Atriyoventriküler septum boyunca atriyoventriküler septum boyunca kesmeye devam edin, ta ki atriyumlar ventriküllerden ayrılana kadar.
17. Sol atriyumu çıkarmak için interatriyal septum boyunca kesin.
18. Düz durmasını sağlamak için diseksiyon pimlerini sağ atriyumun çevresine yerleştirin (Şekil 2D). Castroviejo makasını kullanarak atriyumda kalan yağı, damarları veya dokuları çıkarın.
19. Bu oryantasyonda yaklaşık olarak superior vena kava (üstte), inferior vena kava (altta) ve cristae terminalis (solda) ile sınırlanan sağ atriyumdaki SAN'ı bulun (Şekil 2D).
    NOT: Crista terminalis, sağ atriyal apendiks ile SAN arasında koyu renkli bir kas sırtı olarak görünür. Sıklıkla SAN arterinin de SAN'dan geçtiği görülebilir (Şekil 2D).

Sonuçlar

Şekil 1: Kalbin çıkarılması.(A) Göğüs kafesinin hemen altındaki deride, yaklaşık sol kostal arktan sağ kostal arkta enine kesi. (B) Peritoneal insizyon. (C,D) Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için diyaframın göğüs kafesi boyunca kesilmesi. (E) Akciğerlerin eksizyonunu takiben kalbin çıkarılması.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
22 gauge şırınga iğnesi	Balıkçı Bilimsel	14-826-5A	Diseksiyon için kullanılır
23 gauge şırınga iğnesi	Balıkçı Bilimsel	14-826-6C	Diseksiyon için kullanılır
60 mm Petri Kapları	Genesee Bilimsel	32-105G
Castroviejo Makas, 4"	Güzel Bilim Araçları	15024-10
Diseksiyon Mikroskobu	Jenco Belediyesi
Diseksiyon Pimleri	Güzel Bilim Araçları	26002-20
Dumont #2 Laminektomi Forseps	Güzel Bilim Araçları	11223-20
Dumont #55 Forseps	Güzel Bilim Araçları	11295-51
Ekstra İnce Graefe Forseps	Güzel Bilim Araçları	11152-10
Kanama durdurucu	Güzel Bilim Araçları	13013-14
Heparin	Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram	NDC 63739-953-25
Sylgruard Elastomer Kiti	Dow Corning	184 SIL ELAST KITI 0.5KG
Cerrahi Makas	Güzel Bilim Araçları	14074-09
Transfer Pipetleri (3 mL dereceli)	Samco Bilimsel	225
İzofluran	Patterson Veteriner	07-893-1389