Fareden Sağlam Yumurtalık Alımı: Tam Yumurtalığı Murin Modelinden İzole Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: Mason, J. B. ve ark. Dişi Farelerde Yumurtalık Yaşlanmasının Yaşam ve Sağlık Süresi Etkisini Araştırmak İçin Ortotopik Yumurtalık Nakli Prosedürleri. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, bir fare modelinden sağlam yumurtalık çıkarmak için uygulanan cerrahi bir prosedürü anlatıyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Sağlam yumurtalıkların yaşlı farelere nakli

>NOT: Bu protokol, yumurtalıkların genç bir fareden (60 günlük) aynı akraba suşun üreme sonrası dişisine (12 aylık) transferi sırasında kullanılan prosedürü açıklar. Aynı prosedür, herhangi iki dişi fare arasındaki yumurtalık nakli için de kullanılır.

1. Donör hayvanı intraperitoneal (IP, 27 ga iğne) enjeksiyonu ile, örneğin bir ketamin, ksilazin ve asepromazin kokteyli (65 mg / kg ketamin, 13 mg / kg ksilazin 2.0 mg / kg, asepromazin; kokteyl dozu - 6.5 ml / kg) kullanarak tartın ve uyuşturun. Anestezi etkili olana kadar hayvanı ısıtılmış ev kafesine geri koyun.
2. Anestezi uygulandıktan sonra, hayvanı ev kafesinden çıkarın ve ısıtılmış kağıt havluların üzerine koyun. Makas (# 40 bıçak tercih edilir) kullanarak, kaburgaların hemen altından başlayarak ve distal olarak hareket ederek, yüzüstü farenin her iki tarafında yaklaşık 2-3 cm kare şeklinde kırpılmış bir 'yama' hazırlayarak tüyleri her iki tarafta orta çizgiye birkaç mm yanal olarak çıkarın.
3. Kırpılan alanları %70 etanol ile hafifçe silin ve pamuk uçlu bir çubukla kırpılan bölgeye betadin solüsyonu uygulayın.
4. Gözün korunması için antibiyotik jel uygulayın ve ameliyat sonrası ağrıyı gidermek için hayvanın boynunun yan tarafına deri altına (SC, 27 ga iğne) meloksikam (2.0 mg / kg) uygulayın.
5. Hayvanı ısıtılmış steril bir cerrahi alana yüzüstü pozisyonda yerleştirin ve kırpılan alanı %70 etanolle ıslatılmış 2 cm x 2 cm pamuklu gazlı bezle silin.
6. 1.0-1.5 cm'lik bir paralomber kesi yapın ve cildi alttaki fasyadan künt bir şekilde inceleyin. Fasya boyunca başka bir kesi yapın. Karın boşluğuna ulaşana kadar bu fasyanın altında mümkün olduğunca yüzeysel olarak lateral olarak künt bir şekilde inceleyin
7. Kesinin üzerine küçük bir cerrahi örtü yerleştirin (2 cm x 2 cm gazlı bezden kesilmiş) ve örtüyü steril tuzlu su ile ıslatın.
8. Küçük forsepsler kullanarak, karın boşluğunda yumurtalığı çevreleyen yağ dokusunu bulun ve yağ yastığını ve yumurtalığı nazikçe çıkarın ve ıslatılmış gazlı bez örtüsünün üzerine yerleştirin. Yumurtalık yağ yastıkçığı, çevredeki yağ dokusundan 'daha beyaz' görünecektir.
9. İşlem sırasında yolu yerinde tutmak için yağ yastığının üzerine 1,5 inçlik bir Bulldog kelepçesi yerleştirin (yumurtalık bursasını tıkamamaya dikkat edin).
10. Diseksiyon mikroskobunu yerine yerleştirin ve yumurtalık bursasını net bir şekilde tanımlayın. Bursa'yı iki saatçi forseps ile kavrayın ve yumurtalığı ortaya çıkarmak için yumurtalık hilumunun karşısındaki yumurtalık bursasını kesin. Bursun amaçlanan erişim alanı yüksek derecede vaskülarize ise, yırtılma sırasında kanamayı azaltmak için bursal yüzeye bir şırınga ile bir damla epinefrin (1: 100.000) uygulayın.
11. Yumurtalığı yumurtalık bursasından nazikçe çıkarın ve kanamayı önlemek için yumurtalık hilusuna bir saatçi forseps ile kımpanlayarak yumurtalığı çıkarın.
12. Donör yumurtalığı 4 ° C steril tuzlu su ile doldurulmuş saat camına yerleştirin, gevşek bir şekilde örtün ve nakil için hazır olana kadar bir kenara koyun.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Diseksiyon mikroskobu	Ayarlanabilir çalışma mesafesine sahip herhangi bir diseksiyon kapsamı.
Ilık Su Sirkülatörü ve boyutunuz için uygun cerrahi / kurtarma alanınız için uygun ped.	Stryker/Gaymar	TP700	Sirkülasyonlu su yastıkları, eşit ve tutarlı sıcaklıkta çalışma ve geri kazanım alanları üretir.
Üreme sistemine erişim için cerrahi aletler-diseksiyon aletleri			Spesifik cerrahi aletlerin seçimi son derece cerraha özgüdür
Yumurtalık bursa için dikiş materyali	eSütürler	2809G: 9-0 veya 2810G: 10-0 ETHILON SİYAH 5" BV130-5 KONIK	10-0 sütürün ameliyat alanına düşürülmesi durumunda bulunması zor olabilir.
Emilebilir jelatin sünger	Pfizer	Jel Köpüğü- PFIZER 09-0315-08	Steril koşullar altında küçük (~ 2 mm) parçalar halinde kesin.
Cildin kapatılması için zımbalar	Becton Dickinson'ın fotoğrafı.	MikRon Otomatik Klips 9mm (BD 427631)
Göz merhemi.	MWI Veteriner Malzeme A.Ş.		Puralube steril oftalmik merhem
Anestezi, analjezi ve epinefrin için şırıngalar	MWI Veteriner Malzeme A.Ş.	BD 305536	27g x 3/8in, İntradermal Eğim 1/2ml
Tuzlu su için şırıngalar.	MWI Veteriner Malzeme A.Ş.	BD 309657.	3ml şırınga, Luer-lok ucu, 27g iğne
Makas/bıçak	Andis Antik Kenti	Super AGR+ ™ Akülü Çıkarılabilir Bıçaklı Kesme Makinesi ve CeramicEdge® #40 bıçak.	İnce bıçaklı herhangi bir makas.
etanol	Üniversite kimyasal temini		Kullanım için% 70'e kadar seyreltin.
Betadine çözeltisi	MWI Veteriner Malzeme A.Ş.	3233
2x2 gazlı bez pedleri	MWI Veteriner Malzeme A.Ş.	3073	Ameliyat paketleri ile otoklavlandı
Borosilikat cam boncuklar	Sigma-Aldrich Co	Z273619	Sintilasyon şişelerinde otoklav
4-vinilsikloheksen diepoksit	Sigma-Aldrich A.Ş.	94956

Serisi