$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Kraniyal halkanın ameliyatı ve montajı
>NOT: Fare kurulumu için tam destek, bir blok ve bir plaka, fare kafasını tutmak için halka ve halkayı bloğa sabitlemek için bir vida olmak üzere 4 parçadan oluşur (Şekil 1A). Desteğin tüm unsurları i.materialise.com 3D baskı ile elde edilmiştir. Plaka, akrilonitril bütadien stiren (ABS) polimerinden, paslanmaz çelik blok ve vidadan ve yüksek kaliteli paslanmaz çelik halkadan (yüksek detaylı paslanmaz çelik) yapılmıştır (3D baskı dosyaları için boyutlar ve Malzemeler için Şekil 2'ye bakın). Blok, vidalanmış veya yapıştırılmış olarak desteğe kalıcı olarak sabitlenir. Halka fare kafatasına sabitlendikten sonra, blok tutucuya vidalanmalıdır (Şekil 1A).
- Dezenfeksiyon için% 70 etanol ile ıslatılmış bir kağıt havluyla kafa derisindeki saçları nemlendirin. Tüm gevşek saçları ıslak bir kağıt havluyla çıkarın.
not: Kolaylık sağlamak için, ameliyattan önce kafa derisi tıraş edilebilir.
- Steril ince makas ve cımbız kullanarak kalvaryumu ortaya çıkarmak için orta hatta 1 cm'ye kadar ve kulaklar arasında bir T oluşturarak kafa derisini kesin.
not: Halka, frontal ve parietal kemiklerin üzerine gelecek şekilde konumlandırılacaktır (Şekil 1B).
- Kafatasını ortaya çıkarmak için steril cımbız kullanın. Periosteumu makas ve cımbızla dikkatlice çıkarın. Tüm periosteuumu ve görüntülemeyi değiştirebilecek herhangi bir kalıntı veya kılı çıkarmak için fizyolojik tuzlu su ile ıslatılmış steril bir pamuklu çubuk kullanın.
not: Enflamatuar reaksiyonları sınırlamak için kemiğe zarar vermemeye büyük özen gösterin.
- Tuzlu su ile durulayarak kan izlerini temizleyin ve kemiği kuru bir pamuklu çubukla hızla kurulayın. Tutkal jelini halkaya uygulayın, açıkta kalan kemiğin üzerine yerleştirin ve halkanın kafatasına sıkıca takılması için birkaç saniye tutun.
not: İstenmeyen otofloresansa yol açabileceğinden gözlem alanına hiçbir yapıştırıcı girmemelidir.
- Kafatasını fizyolojik tuzlu suya batırılmış bir pamuklu çubukla hafifçe nemlendirin.
- 1:1 mavi ve sarı bileşenleri dikkatlice karıştırarak silikon diş macununu hazırlayın. Görüntüleme sırasında sızıntıyı önlemek için sızdırmazlık için halkanın her yerine diş macunu sürün. Halkaya girmiş olabilecek herhangi bir diş macunu veya yapıştırıcıyı dikkatlice çıkarın.
- Halkayı tuzlu su ile doldurun ve sızıntı olup olmadığını kontrol edin.
not: Salin, mikroskop objektifi için daldırma ortamı görevi görür. Hemostaz ile ilgili kusurları olan fareler kullanıldığında kanama daha kritik olabilir. Daha fazla görüntülemeyi bulanıklaştırabileceğinden, kanın halkaya girmesini önlemek önemlidir.
- Fareyi desteğin üzerine yerleştirin ve halkayı blok tutucuya vidalayın (Şekil 1C). Kafayı kaldırmak ve halkanın kafatasından ayrılmasını önlemek için hayvanın başının altına katlanmış kompres yerleştirin.
not: Kafa, solunumdan kaynaklanan görüntü hareketlerini engelleyecek şekilde doğrudan sabitlenir.
- Destek ve fare düzeneğini ısıtılmış mikroskop odasına yerleştirin (Şekil 1D).
NOT: Takılan kateteri herhangi bir zamanda yerinden çıkarmamaya dikkat edin.
