Fare Modelinde Pankreatik İntravital Görüntüleme Penceresi Kurulumu: Murin Pankreas Mikroyapısının Hızlandırılmış İn Vivo Görüntülemesi için Entegre Pankreas Görüntüleme Penceresi

Özet

Kaynak: Park, I. et. al. Pankreas İntravital Görüntüleme Penceresi ile Bir Murin Modelinde Pankreasın İn Vivo Hücresel Düzeyde Stabilize Edilmiş Boyuna Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, pankreas mikro yapısının uzunlamasına hızlandırılmış yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi için pankreası bağırsaklardan ayırmak için bir pankreas görüntüleme penceresi yerleştirme prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi

1. Steril bir cerrahi platform hazırlayın ve yüzeyleri %70 etanol ile sterilize edin.
   not: Boylamsal görüntüleme seansları için aseptik teknik esastır.
2. Fareleri tiletamin / zolazepam (30 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile uyuşturun.
   not: Hipergliseminin olumsuz etkisi nedeniyle ketamin yerine tiletamin / zolazepam kullanılması önerilir. Deneyin amacı için en uygun anestezi seçilmelidir.
3. Homeotermik kontrollü bir ısıtma yastığı ile rektal bir prob kullanarak vücut sıcaklığını izleyin.
4. Farenin sol kanadını tıraş edin ve üç tur alternatif alkol ve iyot bazlı ovma uygulayın.
   not: Tüy dökücü krem kullanılıyorsa, kimyasal yanığı önlemek için 1 dakikadan fazla bırakmayın.
5. Farenin sol tarafında 1,5 cm'lik bir kesi yapın ve cildi ve kası inceleyin.
6. Kesi kenarında siyah veya naylon 4-0 sütür ile bir çanta ipi sütürü gerçekleştirin.
7. Kesi üzerinde bir mikro ekartör kullanın ve dalağı nazikçe ortaya çıkarın.
8. Dalağı halka forseps ile dikkatlice birleştirin ve pankreası tanımlayın.
9. Pencereyi farenin yan tarafına yerleştirin ve dalak ve pankreası pencerenin açık alanından geçirin. Pankreasın manipülasyonu, kanamaya veya pankreatite neden olabileceğinden çok nazik olmalıdır.
   not: Pankreası karın boşluğundaki bağırsaktan ayırmak için pankreas intravital görüntüleme penceresini özel olarak tasarlayın (Şekil 1A, B).
10. Pankreası yavaşça görüntüleme penceresinin plakasına yerleştirin; dalak pencerenin açık alanına yerleştirilecektir.
11. Görüntüleme penceresinin kenarına N-bütil siyanoakrilat yapıştırıcı damlaları uygulayın.
    1. Uygulanan yapıştırıcı miktarını en aza indirmek için, uygulama için 31 G'lik bir kateter iğnesi kullanın. Damla miktarı büyükse, doku istemeden pencereye veya kapak camına yapışacaktır.
12. Görüntüleme penceresinin kenarına 12 mm'lik yuvarlak bir kapak camını nazikçe uygulayın.
13. Dikiş halkasını pencerenin yan oluğuna sığacak şekilde çekin ve üç kez bağlayın.
14. Bu fareler uyanıkken sıkı dikişlerin kesilmesini önlemek için düğümün maksimum proksimal bölgesini kesin.
15. Farelerin anesteziden (2-3 saat) kurtulmasına izin verin ve ağrıyı gidermek için ketoprofen (5 mg / kg, hayvanın boynunun veya kalçasının tabanındaki gevşek deride deri altı) enjekte edin. Her 12 saatte bir ağrı belirtilerini yeniden değerlendirin ve ketoprofen 1-3 gün boyunca her 24 saatte bir düşünülmelidir.
    not: Analjezi, glukoza yanıt olarak insülin sekresyonunu etkiler. Analjezi seçimi ve zamanlaması deneysel amaç için kişiselleştirilmelidir.
16. Pencerenin kafese temasını önlemek için fareyi yeterli yatak takımı ile kafese yerleştirin. Pencere ameliyatı olmadan evi farelerle birlikte barındırmaktan kaçının.

Sonuçlar

Şekil 1. Pankreas intravital görüntüleme penceresinin tasarımı ve fotoğrafı. (A) Pankreas intravital görüntüleme penceresinin 3D ve kesitsel görünümü. (B) Pankreas görüntüleme penceresinin ön ve arka fotoğrafı.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Dairesel kapak camları	Marienfeld	111520	Pankreas görüntüleme penceresi için kapak camı
IRIS Makas	JEUNGDO BIYO VE BITKI CO, LTD	S-1107-10	Bu ürün, başka bir şirketin ürünü ile değiştirilebilir
Loctite 401	Henkel Tekstil	401	N-bütil siyanoakrilat yapıştırıcı
Mikro İğne tutucu	JEUNGDO BIYO VE BITKI CO, LTD	H-1126-10	Bu ürün, başka bir şirketin ürünü ile değiştirilebilir
Mikro toplayıcı	JEUNGDO BIYO VE BITKI CO, LTD	17004-03	Bu ürün, başka bir şirketin ürünü ile değiştirilebilir
Mikroforseps	JEUNGDO BIYO VE BITKI CO, LTD	F-1034	Bu ürün, başka bir şirketin ürünü ile değiştirilebilir
Naylon 4-0	AYŞE	NB434	Emilmeyen Sütür
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	Vasküler Kateter için sadece İğne kısmını kullanın
Pankreas görüntüleme penceresi	Geumto Mühendislik	Özel sipariş	Pankreas görüntüleme penceresi - özel sipariş
Fizyo Süit	Kent Bilimsel	PS-02	Homeotermik sıcaklık kontrolörü
Yüzük Forseps	JEUNGDO BIYO VE BITKI CO, LTD	F-1090-3	Bu ürün, başka bir şirketin ürünü ile değiştirilebilir
Rompun (Rompun	Bayer	Rompun (Rompun	Anestezik ajan
Zoletil Belediyesi	Başak	Zoletil 100	Anestezik ajan
BALB/C Çıplak	Doğu Biyografisi	BALB/C Çıplak	BALB/C Çıplak

Belediyesi Serisi Uçağı Serisi Serisi Serisi ) )