Fareden Retina Kupası Ekstraksiyonu: Fare Gözünden Sağlam Retina Kupası Elde Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: Jiang, K. et al. Ex Vivo Retinal Doku Örneklerinde Mitokondriyal Solunum ve Glikoliz Tayini. J. Vis. Deneyim (2021)

Bu videoda, dış kaplama katmanları olmadan retina kabını farenin göz küresinden izole etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Çıkarılan retina dokusu, retina hücrelerinde meydana gelen çeşitli metabolik yolların incelenmesine yardımcı olabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Retina kabı diseksiyonu

1. Ötenazi ile ilgili kurumsal yönergeleri izleyerek CO₂ boğulması ile bir fareye ötenazi yapın.
   not: Hayvanı ötenazi için gereken süreden daha uzun süre CO₂ odasında bırakmayın.
2. Gözleri enüklee edin ve bir petri kabındaki buz gibi 1x PBS tamponuna yerleştirin ve ardından bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin.
3. Göz küresinin dışına takılan ekstra rektus kaslarını mikromakasla keserek dikkatlice çıkarın ve optik siniri kesin.
4. Korneanın (limbus) kenarında bir delik açmak için 30 G'lik bir iğne kullanın; bu, mikromakas için yerleştirme yeri görevi görür. Ardından, korneanın kenarı boyunca dairesel bir kesim yapmak için ince bir diseksiyon mikromakası kullanın ve onu arka göz kabından ayırın.
5. Kornea, lens ve vitreus mizahını göz kabından uzaklaştırmak için keskin diseksiyon forsepsleri kullanın.
6. Göz kabının kenarındaki skleral tabaka üzerinde birkaç küçük kesi yapmak için ince diseksiyon mikromakası kullanın. Retina tabakasını kesmekten kaçının. Kesiğin her iki tarafındaki skleral dokuya tutunmak için iki keskin diseksiyon forseps kullanın ve nöral retinadan çıkarmak için skleral tabakayı çok dikkatli bir şekilde çekin. Tüm sklera çıkarılana ve sağlam bir retina kabı elde edilene kadar bunu göz kabının etrafında tekrarlayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 adet PBS	Termo Balıkçı	14190-144
30 gauge iğne	BD Hassas Kayma	305106
Biyopsi zımbası, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
CO2 boğulma odası
Diseksiyon forseps-Dumont #5	Güzel Bilim Araçları	11251-10	Stright ucu
Diseksiyon forseps-Dumont #7	Güzel Bilim Araçları	11274-20	Kavisli uç
Diseksiyon mikroskobu
Graefe forseps	Güzel Bilim Araçları	11051-10	Kavisli, Tırtıklı uç
Mikro makas	Güzel Bilim Araçları	15004-08	Kavisli uç