Murin Tail Lenfödem Modeli: Murin Tail'de Sürekli Lenfödem Oluşturmak İçin İn Vivo Bir Teknik

Özet

Kaynak: Hassanein, AH ve diğerleri, Bir Fare Kuyruğu Lenfödem Modeli. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, interstisyel doku boşluğunda kuyrukta şişmeye yol açan anormal bir sıvı birikimi olan murin kuyruğu lenfödemi oluşturmak için in vivo bir teknik açıklanmaktadır. Model, lenfödem mekanizmalarını ve tedavisini incelemek için uygulanır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Fare Kuyruğu Lenfatiklerinin Cerrahi Bozulması

1. Eşit cinsiyet dağılımına sahip sekiz haftalık C57BL / 6 fare kullanın.
2. Bir fareyi genel anestezi altında% 100 oksijende% 3-4 izofluran içeren bir indüksiyon odasına yerleştirin ve ardından işlem sırasında% 1-3 oranında idame sedasyonu uygulayın.
3. Ağrı kontrolü için deri altına 0.5 mg / kg sürekli salimli (SR) buprenorfin uygulayın.
   not: Ameliyat sonrası uygulanan ek analjezik ilaçlar: En az 48 saat boyunca her 24 saatte bir Carprofen ve kesi yapıldıktan sonra veya insizyon kapanmadan önce bir kez Bupivakain, cilt kenarlarına damlatılarak uygulanır (4 – 6 saate kadar sürer).
4. Fareyi sırtlamasına yerleştirin ve kuyruğu %70 izopropil alkolle hazırlayın.
5. İşlemden önce kuyruk çapını, bir kumpas kullanarak kuyruğun tabanından 20 mm'den başlayarak 5 mm'lik artışlarla ölçün. Bu ölçümler, kesilmiş koni denklemini kullanarak hacmi hesaplamak için kullanılacaktır.
6. Tabandan 20 mm uzakta kuyrukta 3 mm'lik bir çevresel eksizyon işaretleyin.
7. Steril bir cerrahi bıçakla (15 numara) 3 mm'lik titiz bir cilt eksizyonu gerçekleştirin ve alttaki tüm damar sistemini cerrahi mikroskobik büyütme altında sağlam bırakın. Önce dermisten üst çevresel işareti (kuyruk tabanından 20 mm) kesin, ardından ilk insizyona 3 mm distalde çevresel tam kalınlıkta bir kesi yapın
   1. İki kesiyi birleştirmek için dik tam kalınlıkta dikey bir kesi yapın. Ön kenarı kavramak için dişli ince bir alıcı kullanın ve avasküler düzlemin derinliklerinde dermise ve yüzeysel olarak damar adventitisine dikkatlice incelemek için mikro makas kullanın.
8. Kuyruğun ucuna subkutan proksimalde 0.1 mL izosülfan mavisi (% 1) enjekte edin.
9. Cerrahi mikroskop altında lateral kuyruk damarlarına bitişik iki lenfatik kanalı tanımlayın. İzosülfan enjeksiyonu nedeniyle lenfatikler mavi görünecektir. Düz mikrocerrahi makas kullanarak lenfatikleri kesin. Lateral ven ve lenfatik arasındaki bir düzlemi dikkatlice incelemek için makası kullanın. Daha sonra bir makas bıçağının ucunu lenfatik damar ile yan damar arasından geçirin ve lenfatik damarı kesmek için bıçakları kapatın.
10. Kuyruk yarasını steril, yapışık, şeffaf bir pansumanla pansuman yapın. Enfekte olmadıklarından veya kanama olmadıklarından emin olmak için ameliyat sonrası kesileri günlük olarak kontrol edin ve 2 hafta boyunca yara bakımı sağlayın.
11. Kuyruğun daha fazla yaralanmasını önlemek ve hayvanların birbirlerini ısırmasını önlemek için hayvanları tek tek barındırın, bu da cerrahi komplikasyonlara yol açacaktır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Cerrahi Mikroskop	Leica, Wetzlar, Almanya	MSV266
Yapışık Pansuman (Tegaderm)	3M, Aziz Paul, Minn.	1626W
C57BL/6 fare	Jackson Laboratuvarları	664
Mikro Adson Forseps - 1x2 Diş	Güzel Bilim Araçları (ABD) Inc.	11019-12
Tek Kullanımlık İğne 30GX1	Fischer Bilimsel	305128
Ameliyat Makası	Fischer Bilimsel	12-460-796
İzosülfan Mavisi (Lenfazorin) 50mg/5ml	Fransa	67457-220-05

Serisi