İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması: İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Geliştirmek İçin Farede Üropatojenik Bakterilerin Uygulanması İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Luyts, N. et al., Biyolüminesans Görüntüleme Kullanılarak Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonlarının ve Tedavisinin Boyuna Takibi. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, farelerde idrar yolu enfeksiyonu modeli oluşturmak için üropatojenik bakterilerin intravezikal uygulama tekniğini açıklıyoruz. Bu model, üropatojenik bakteriyel enfeksiyonun üriner sistem içindeki yayılımını ve İYE duyarlılığını belirleyen mekanizmaları anlamak için kullanılabilir.

Protokol

1. Hayvanların aşılanması

1. Hayvanların hazırlanması
   1. Araştırma sorusuna ve nakavt hatlarının mevcudiyetine, deneysel ayrıntılara ve İYE duyarlılığındaki farklılıklara bağlı olarak istenen fare suşunu (suşlarını) seçin. Dişi farelerde transüretral kateterizasyonun daha kolay olduğunu unutmayın. İmmünolojik olarak olgunlaşmamış oldukları için 8 haftadan küçük hayvanları kullanmayın. Burada 12 haftalık dişi C57Bl/6J fareler kullanıldı.
   2. Hayvanları önceden sipariş edin ve ideal olarak 7 gün boyunca alışmalarına izin verin. Ev hayvanlarını, standart 12 saat aydınlık/karanlık koşullarında, ayrı ayrı havalandırılan kafeslerde gruplandırın.
   3. Sinyal kaybını sınırlamak için hayvanların karın bölgesini tıraş edin. Hayvanların derisini hızlı bir şekilde yakabileceği için tüy dökücü krem kullanmayın. Baskın el ile tıraş olurken baskın olmayan el ile tırnağı ve arka bacakları sıkıca tutarak hayvanı kısıtlayın. Alternatif olarak, izofluran anestezisi altında tıraş olun.
      not: Hayvanlar, tıraşlı bölgeyi daha da tımar edeceği düşünülerek görüntülemeden 2 gün önce tıraş edildi.
   4. Deney boyunca su ve standart gıda ad libitum sağlayın. Bununla birlikte, damlatma sırasında mesane hacmini en aza indirmek için damlatmadan 2 saat önce hayvanları sudan mahrum bırakın.
   5. 100 μL'lik bir şırıngaya steril bir 24 G anjiyokateter ucu takın ve şırıngayı bakteriyel bir çözelti ile doldurun.
2. Hayvanların aşılanması
   1. Hayvanları bir indüksiyon odasına yerleştirin ve taşıyıcı gaz olarak saf oksijen ile izofluranın solunmasını kullanarak uyuşturun (% 3'te indüksiyon ve% 1.5'te bakım).
   2. Bir hayvanı sırtüstü pozisyonda bir çalışma yüzeyine yerleştirin ve damlatma sırasında bir burun konisi kullanarak stabil bir izofluran anestezisi sağlayın. Göz merhemini uygulayın.
   3. Hafif bir kompresyon uygulayarak ve suprapubik bölge üzerinde dairesel hareketler yaparak kalan idrarı dışarı atın. Damlatmadan önce alt karın bölgesini %70 etanol ile temizleyin.
   4. Kateter ucunu normal tuzlu su ile yağlayın. Baskın olmayan elin işaret parmağını karnın üzerine koyun ve yavaşça yukarı doğru itin. Üretranın kateterizasyonuna 90°'lik bir açıyla (dikey olarak) başlayın ve dirençle karşılaşıldığında, daha fazla yerleştirmeden önce (0,5 cm) yatay olarak eğin.
      not: Üretraya zarar vereceği için kateteri asla zorla itmeyin. Nazik döndürme hareketleri kateter yerleştirilmesinde yardımcı olabilir. Öte yandan, direnç eksikliği genellikle vajinaya hatalı yerleştirildiğini gösterir.
   5. 50 μL bakteri aşısının (2 x 10⁷ CFU) yavaş (5 μL/sn) damlatılmasını gerçekleştirin.
      not: Daha yüksek hacimler veya daha hızlı damlatma böbreklere reflüye neden olabilir. Tekniğin uygulanması sırasında, reflüyü değerlendirmek için mavi mürekkep kullanılabilir.
   6. Damlatmadan sonra, şırıngayı ve kateteri birkaç saniye daha yerinde tutun ve ardından sızıntıyı önlemek için yavaşça geri çekin. Yüksek miktarda sızıntı veya kanlı bir meatus gibi düzensizlikleri kaydedin ve gerekirse hayvanları hariç tutun.
   7. Hayvanı görüntüleme odasının burun konisine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve kalan tüm hayvanlar için önceki 1.1.1-1.1.6 adımlarını tekrarlayın. Her deney grubu için bir kateter kullanın. Anesteziye devam edildiğinden emin olun ve ilk ve son hayvan arasındaki süreyi en aza indirin.
   8. Gerekirse, görüntülemeden önce veya sonra antibiyotik veya deneysel ilaçlar verin (adım 3). Örneğin, enrofloksasin uygulamak için, 1/100 seyreltme elde etmek için 3.96 mL fizyolojik saline 40 μL enrofloksasin (100 mg / mL) çözeltisi ekleyin. 3 gün boyunca günde iki kez 10 mg / kg enrofloksasin uygulamak için sabah 9'da ve akşam 5'te deri altına 100 μL / 10 g enjekte edin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Aesculap IŞİD	Aesculap Belediyesi	GT421	saç düzeltici, GT608 kapaklı
Anestezi buharlaştırıcı	Harvard aygıtı sınırlı	Yok	https://www.harvardapparatus.com/ harvard-apparatus-anestheticvaporizers.html
BD Insyte Autoguard 24 GA	Bd	382912	Sarı anjiyokateter, damlatma için steril plastik uç kullanın
C57Bl/6J fareler	Janvier (Janvier)	Yok
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Suyu, Gibco	ThermoFisher Bilimsel	REFERANS: 14040-083
Etanol %70 denatüre 5L	VWR uluslararası	85825360
Hamilton GASTIGHT şırınga, PTFE luer kilidi, 100 μL	Sigma-Aldrich	26203	50 μL'lik yavaş bakteri damlatmasını sağlamak için
Iso-Vet 1000mg/g	Dechra Veterinerlik ürünleri	Yok	İzofluran