$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Malzeme ve aletlerin hazırlanması
- Anestezi sırasında operasyon alanının sıcaklığını ve fare vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak için ısı battaniyesini bağlayın.
- Otoklav makası ve forseps,% 70 etanol çözeltisi hazırlayın ve dekspantenol göz merhemi, birkaç parça pamuk ve 5-0 kaplamalı örgülü polyester sütürü kullanıma hazır bulundurun. Hayvanın kesi bölgesini nemli tutmak için% 0.9 tuzlu su çözeltisi (iğnesiz) içeren 1 mL'lik bir şırınga hazırlayın. Anestezi gazını hazırlayın (% 100 O2 + izofluran).
- 10 μL'lik bir pipet ucunun (3-5 mm uzunluk) ucunu keserek lazer Doppler probu için bir tutucu hazırlayın.|
NOT: Tüm aletler sıcak boncuk sterilizatörü kullanılarak sterilize edilir. Yüzeyler ayrıca ameliyat öncesi ve sonrası mikrobiyal dezenfektan sprey ile dezenfekte edilir. Ameliyattan önce, farelerin başını ve göğsünü çevreleyen alanlar bir yara dezenfeksiyon spreyi ile dezenfekte edilir.
2. Lazer Doppler'in hazırlanması
- Ameliyattan 30 dakika önce fareye analjezi enjekte edin (intraperitoneal olarak 4 mg/kg Carprofen ve 0,1 mg/kg Buprenorfin).
- Fareyi, spontan vücut hareketi ve vibrissae durana kadar% 4'lük bir izofluran akış hızına sahip indüksiyon odasına yerleştirerek uyuşturun.
- Fareyi, burnu anestezi maskesinin içinde olacak şekilde operasyon bölgesinde yüzüstü pozisyonda yerleştirin. İzofluran konsantrasyonunu bir dakika daha% 4'te tutun, ardından azaltın ve% 2'de tutun.
- Fare vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak için ilgili geri besleme kontrollü ısıtma yastığını ayarlayın ve cerrahi prosedürler boyunca sıcaklığı izlemek için rektal probu nazikçe yerleştirin.
- Her iki göze dekspantenol göz merhemi sürün.
- Sol göz ve kulağı çevreleyen cildi ve saçı %70 etanol ile dezenfekte edin.
- Kafatası kemiğini ortaya çıkarmak için sol kulak ile göz arasındaki kafa derisini (1 cm uzunluğunda) kesin.
- Kafatasının altındaki MCA'yı görselleştirmek için temporal kası kesin ve emekli edin.
- Lazer Doppler probunu/fiberini sol MCA'nın üstünde tutan ucun dış kısmını yapıştırıcı ile yapıştırıcı ile sabitleyin. Ardından, uç tutucunun etrafındaki yarayı kapatmak için cildi yapıştırın. İşlemi hızlandırmak için 2-3 damla sertleştirici yapıştırıcı uygulayın. Lazer Doppler fiberinin yapıştırılmadığından ve herhangi bir zamanda uç tutucudan kolayca çıkarılabildiğinden emin olun.
>3.Geçici MCAo modeli (oklüzyon)
- Fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Burnu anestezi konisine koyun ve pençeleri bantla sabitleyin.
- Göğsü çevreleyen cildi ve kılları dezenfekte edin ve boyunda 2 cm uzunluğunda orta hat kesisi yapın.
- Cildi ve submandibular bezleri ayırmak için forseps kullanın. Sternomastoid kası tutmak, cerrahi alanı ortaya çıkarmak ve sol ortak karotis arteri (CCA) bulmak için ekartörler kullanın. CCA'yı bağ dokusundan ve çevresindeki sinirlerden (vagal sinire zarar vermeden) diseksiyon yapın ve bifurkasyondan önce geçici bir ligasyon gerçekleştirin.
- Dış karotis arteri (ECA) diseke edin ve en distal görünür kısımda kalıcı bir düğüm atın. ECA'nın altına, çatallanmaya yakın başka bir sütür yerleştirin ve daha sonra kullanmak üzere gevşek bir düğüm hazırlayın.
- İç karotis arteri (ICA) diseksiyon yapın ve üzerine bifurkasyonun 5 mm üzerine bir mikrovasküler klips yerleştirin. Vagal sinire zarar vermediğinizden emin olun.
- ECA'ya sıkı ve gevşek ligasyonlar arasında küçük bir delik açın; ECA'nın tamamını kesmemeye dikkat edin.
- Filamenti tanıtın ve CCA'ya doğru ilerletin. Filamenti bu pozisyonda kısa bir süre sabitlemek ve mikrovasküler klipsi çıkarırken kanamayı önlemek için lümen etrafındaki ECA'daki gevşek ligasyonu sıkın.
- Mikrovasküler klipsi çıkarın ve lazer Doppler tarafından ölçüldüğü gibi serebral kan akışında keskin bir azalma (%>80) tespit ederek MCA'nın kökenine ulaşılana kadar filamenti ICA'dan geçirin. ECA.
etrafındaki düğümü daha da sıkarak filamenti bu konumda sabitleyin
not: Filament uygun yöne doğru gittiğinde düzgün bir şekilde ilerler ve herhangi bir direnç gözlenmemelidir.
- Filament yerleştirilmeden önce ve sonra lazer Doppler değerlerini kaydedin.
- Yarayı dikmeden önce ekartörü çıkarın ve sternomastoid kasın ve submandibular bezlerin yerini değiştirin. Lazer Doppler probunu çıkarın ve hayvanı 1 saat boyunca (filament çıkarılana kadar) 37 °C'de bir kurtarma odasına yerleştirin.