Fare Proksimal Kolon Döngü Modelinin Oluşturulması: İntraluminal Enjeksiyonu Takiben Serumda Floresan İşaretleyicilerin Saptanmasıyla Proksimal Kolon Halkası Oluşturmak ve Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Özet

Kaynak: Boerner, K. et al. Farelerde Bağırsak Geçirgenliği ve Nötrofil Transepitelyal Migrasyonunun Standartlaştırılmış Bağırsak Döngü Modeli Kullanılarak Fonksiyonel Değerlendirmesi. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, fare proksimal kolon halkası veya pcLoop segmenti oluşturmak için cerrahi bir prosedürü ve ardından bağırsak epitel geçirgenliğini incelemek için segmente intraluminal floresan belirteçleri enjeksiyonunu açıklıyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. Proksimal kolon döngüsünün oluşturulması (pcLoop)

1. Cilt hazırlığı: Karın orta hattının kürkünü alkollü bezler veya %70 Etanol ile ıslatılmış gazlı bez süngerle ovalayın. Hipotermiyi önlemek için geniş bir kürk alanını alkolle ıslatmayın.
2. Makas kullanarak orta hat laparotomisi yapın. Karnın ortasında (yaklaşık 2 cm uzunluğunda) dikey bir kesi yapın ve peritonu ortaya çıkarın. Karın içi organlara zarar vermemeye dikkat edin.
3. Önceden kesilmiş ıslak pamuklu gazlı bezi açıkta kalan karın içi boşluğun üzerine yerleştirin.
4. Çekumu harekete geçirmek ve dışsallaştırmak için ıslak pamuklu çubuklar kullanın. Çekumu ıslak pamuklu gazlı bezin üzerine dikkatlice yerleştirin.
   not: Caecum, hayvanın cinsiyetinden bağımsız olarak farelerin çoğunda karın boşluğunun sol kaudal kadranında lokalizedir.
5. Islak pamuklu çubuklar kullanarak, tüm ileumun dışını kapatın ve ıslak pamuklu bir gazlı bezin üzerine yerleştirin. Proksimal kolonu ve mezokolonda bulunan kan akışını tanımlayın. Proksimal kolonu mobilize edin ve ince uçlu forseps kullanarak mezokolonda damarsız bir alanda, çekumdan yaklaşık 0.5 cm uzakta ilk ligatürü oluşturun (Şekil 1B).
6. İlk bağdan 2 cm uzakta ölçün ve mezokolonda kanlanmamış bir alanda ikinci bir bağ oluşturun (Şekil 1C).
7. 2 cm uzunluğunda bir pcLoop.
   izole etmek için her ligasyonun yanında dikkatlice kesilmiş ince makas kullanarak not: 4 cm'lik ileal halkayı izole etmek, kan akışını ve mezenterik membranı sağlam tutmak için her ligasyonun yanında dikkatlice kesilmiş ince makasla, lümen içeriğinden nazikçe temizlenen bir pcLoop'u izole etmek için her iki ucu da kesmek önemlidir. Küçük damarların bağırsak lümenine kanamasını önlemek için kolon dokusunu ve mezokolonu dikkatlice kesin. Gerekirse, kesi yerinde kanamayı sınırlamak için termal koter kullanın.
8. 10 mL şırıngaya bağlı esnek sarı bir besleme tüpü kullanarak dışkıyı çıkarmak için pcLoop'u ılık HBSS ile nazikçe yıkayın (Ilık HBSS ile doldurulmuş 10 mL şırınga hazırlayın ve sarı bir besleme tüpüne takın. Bu şırınga, ameliyat sırasında maruz kalan dokuları nemlendirmek için kullanılacaktır).
9. Yıkanmış pcLoop'un iki kesik ucunu ipek sütür kullanarak bağlayın.
10. FITC-dextrans (HBSS'de 1 mg / mL) gibi 200 μL reaktifi yavaşça enjekte etmek için 30G iğneli 1 mL'lik bir şırınga kullanın. Serum alımından sonra standart eğriyi hazırlamak için kullanılmayan FITC-dextran solüsyonunu ışıktan koruyun). pcLoop şişerek mukozanın orta derecede şişmesine neden olur (Şekil 1D).
    not: Reaktifi mezenterik arterin karşı tarafındaki pcLoop lümenine enjekte edin. Hayvanlar arasında tutarlılığı sağlayın ve mukozanın eşit şekilde dağılmasını sağlamak için 2 cm uzunluğunda bir pcLoop oluşturun.
11. Bağlanmış pcLoop, ileum ve çekumu karın boşluğuna nazikçe geri yerleştirmek için ıslak pamuklu çubuklar kullanın.
12. Karın duvarını kapatmak için iğne tutucu, anatomik forseps ve ters kesme iğneli 3.0 emilmeyen ipek dikişler kullanın.
13. Hayvanı kuluçka süresi boyunca sıcaklık ayarlı bir anestezi odasına yerleştirin.

Sonuçlar

Şekil 1: Proksimal kolon döngü modeli. (A) pcLoop modeline şematik genel bakış. Anestezi altında farelere medyan laparotomi yapılır ve sıcaklık kontrollü bir ameliyat tahtasına yerleştirilir. (B) Çekum (*), proksimal kolon, mezokolon ve ileumun dışsallaşması. Ligasyon için iki uygun bölge tanımlanmıştır (1,2). (C) Birinci bağ (1) çekuma yakın yerleşti...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ekipman ve Malzeme
BD Alkollü Swablar	Bd	326895
BD 1ml İğnesiz Tüberkülin Şırıngası	Bd	309659
BD PrecisionGlide İğne, 25G x 5/8"	Bd	305122
BD PrecisionGlide İğne, 30G x 1/2"	Bd	305106
Pamuk Uçlu Aplikatör (pamuklu çubuk), 6", steril	Balıkçı Bilimsel	25806 2WC
Dynarex Pamuk Dolgulu Gazlı Bez Süngerler, Steril Olmayan, 2" x 2"	Medex	3249-1
EZ-7000 anestezi buharlaştırıcı (Klasik Sistem, ısıtma üniteleri dahil)	E-Z Sistemleri	EZ-7000 Serisi
Kimwipes, küçük (mendil)	Balıkçı Bilimsel	06-666
Moria İnce Makas	FST (Türkçe)	14370-22
Puralube Veteriner Merhemi, Steril Oküler Kayganlaştırıcı	Kır	12920060
Yüzük Forseps (künt doku forsepsleri)	FST (Türkçe)	11103-09
Roboz Cerrahi 4-0 İpek Siyah Örgülü, 100 YD	Balıkçı Bilimsel	NC9452680
Semken Forseps (anatomik forseps)	FST (Türkçe)	1108-13
Sofsilk Emilmeyen Kaplamalı Siyah Sütür Örgülü İpek Boyut 3-0, 18 ", İğne 19mm uzunluk 3/8 daire ters kesme	Henry Schein ·	SS694
Öğrenci İnce Forseps, Açılı	FST (Türkçe)	91110-10
10ml Şırınga PP / PE iğnesiz	Kırlangıç Sigma	Z248029
Reaktif
İzofluran	Halokarbon	12164-002-25
Floresein İzotiyosiyanat-Dekstran, ortalama molekül ağırlığı 4.000	Sigma	60842-46-8