Myofiber İzolasyonu: Hasat Edilen Fare Ekstansör Digitorum Longus (EDL) Kasından Tek Myofiber Elde Etme Tekniği

Özet

Kaynak: Hüettner, S.S. et al. Yetişkin Kas Kök Hücre İşlevselliğinin Değerlendirilmesi için Tek Miyofiber Kültür Testi Ex Vivo. J. Vis. Exp. (2021)

Bu video, hasat edilen murin Ekstansör Digitorum Longus (EDL) kasından tek miyoliflerin izolasyonunu göstermektedir. İzole edilen miyofiberler, miyofiber ile ilişkili kas kök hücre aktivitesini incelemek için kültürlenebilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. EDL kas izolasyonu ve kollajenaz sindirimi

1. Kontaminasyonu önlemek için tüm ekipmana %70 etanol püskürtün.
2. Fareyi, hayvan deneyleri için ulusal düzenlemelere uygun olarak kurban edin.
3. Farenin arka ayaklarına% 70 etanol püskürtün. Cildi çıkarmak ve alttaki kasları ortaya çıkarmak için sertleştirilmiş ince kavisli makas (24 mm kesici kenar) ve ince forseps (Dumont 7, kavisli veya düz) kullanın. Altta yatan kasların kürkle herhangi bir temasından ka....

Sonuçlar

Şekil 1. Fare EDL diseksiyonu ve tek miyofiber izolasyonu.(A) Farenin arka ayağının derisi çıkarılır ve TA (tibialis anterior) kasını ortaya çıkarmak için fasyayı çevreleyen kas çekilir. (B) Beyaz okla işaretlenmiş EDL (ekstansör digitorum longus) kasını ortaya çıkarmak için TA kası çıkarılır. (C) EDL kası, tendonlar.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kollajenaz tip 1	Sigma	C0130
DMEM (Dulbecco'nun 4.5 g/l glikoz ve sodyum piruvat içeren modifiye edilmiş Eagle besiyeri)	GibCo Şirketi	41966029	Hücre kültürü ortamı
Fetal sığır serumu	Gibco (Gibco)	10270-106	Fetal sığır serumu

Serisi