Sarnıç Magna'da İzleyici Molekül Dağıtımı: Domuzda Sarnıç Magna'nın Doğrudan Kanülasyonu Yoluyla Floresan İzleyici Molekülleri Verme Yöntemi

Özet

Kaynak: Bèchet, N. B., et al. Domuzların Sarnıç Magna'sında Doğrudan Kanül İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu video, bir domuz beyninde cisterna magna'nın doğrudan kanülasyonu yoluyla izleyici molekül iletimi protokolünü açıklar. Bu yöntem, beyin omurilik sıvısının glifatik sistemdeki dağılımını görselleştirmeye yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Kanülasyon ve enjeksiyon

NOT: Bu adım en az iki kişi gerektirir ve hayvanın başı yüksekte ve boynu bükülmüş olarak gerçekleştirilir.

1. Cerrahi olarak erişilebilir cisterna magna ile önceden ameliyat edilen anestezi uygulanmış bir domuzla başlayın.
2. Bir kişinin hayvanın başını ve boynunu kaldırıp esnettiğinden, diğerinin ise cisterna magna'yı palpe ederek anatomik konumunu not ettiğinden emin olun.
3. 22 G'lik bir kanülü duradan ve uzunlamasına eksene eğik bir açıyla cisterna magna'ya yavaşça ve dikkatlice sokun.
   not: Kanülü çok derine sokmayın, çünkü bu beyne zarar verebilir. Kanülün ne kadar uzağa yerleştirileceğini bilmek, kanülün durayı delmesinin nasıl bir his olduğunu anlama konusunda deneyim kazandırır. Esasen, dura delindiği gibi, kanül de başarılı bir izleyici enjeksiyonu için yeterince derindir. Bu derinlik yaklaşık 3-5 mm'dir ancak hayvanın boyutuna veya yaşına göre farklılık gösterecektir. Başarılı kanülasyon, kanüle çıkan berrak, pulsatil BOS'un görselleştirilmesiyle hemen belirgin olmalıdır. En iyi sonuç için, kişinin dural piercingi anlamasını sağlamak için ötenazi yapılmış hayvanlarda önceden birkaç kanülasyon uygulanması önerilir.
4. İğneyi kanülden geri çekin ve kilidin üzerine bir kapak yerleştirin.
5. İlk olarak, kanülün dokuya girdiği yere süper yapıştırıcı ve bir hızlandırıcı uygulayın, ardından diş çimentosunun uygulanması izleyin. Çimentonun sertleşmesi için 5 dakika bekleyin.
6. Kapağı kanülden dikkatlice çıkarın ve 10 cm uzatmalı IV hattı musluğunun erkek ucunu izleyici ile kanüle takın.
7. İzleyiciyi elle veya 100 μL/dk hızında bir mikro infüzyon pompası kullanarak yavaşça enjekte edin. 10 cm uzatmalı 3 IV hat musluğunu çıkarın ve kapakla değiştirin. İzleyici artık kanülün tabanında titreşen görünür olmalıdır.
   not: Elle enjekte ediliyorsa, bunu kanül şaftında, diş çimentosunun şaftı kapladığı yerin yaklaşık 1-2 mm yukarısında izleyici hala görünene kadar yapın.
8. Enjeksiyonu takiben, bir miktar fleksiyonu korumak için boynun altına kum torbaları yerleştirin. Baş daha sonra serbest bırakılabilir ve hayvan dinlenme yüzüstü pozisyonda bırakılır.
9. Kendini tutan ekartörleri serbest bırakın ve kasları daha önce olduğu gibi yerleştirin. Cerrahi havlu kelepçeleri kullanarak cildi kasların üzerinde bir araya getirin.
10. Isı kaybını sınırlamak için havlu kelepçelerini ve kesiği gazlı bezle ve ardından bir battaniyeyle örtün.
11. Pentobarbital enjeksiyon (140 mg / kg) ile hayvana ötenazi yapmadan önce izleyicinin istenen süre dolaşmasına izin verin. Bir stetoskop ile oskültasyon sırasında kalp seslerinin yokluğuyla ötenaziyi onaylayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
18G iğne	Sıhhiye
1ml Şırınga	Fischer Bilimi	15849152
20 gr kanül	Sıhhiye	Na
22 gr kanül	Sıhhiye	Na
Sığır serum albümini Alexa-Fluor 647 Konjugat	ThermoFischer (TermoFischer)	A34785	2 şişe (10mg)
CaCl2	Sigmaaldrich Belediyesi	C1016
Diş çimentosu	Agnthos (Ağntüs)	7508
glikoz	Sigmaaldrich Belediyesi	G8270
Insta-Set CA Hızlandırıcı	BSI-Inc	BSI-151
IV hat TAP, 10 cm uzatmalı 3	Bbraun Belediyesi	Na
Kartal	Sigmaaldrich Belediyesi	P9333 Serisi
Keçeli kalem	Na	Na
MgCl2	Sigmaaldrich Belediyesi	M8266
MilliQ su	Na	Na
NaCL (Doğal	Sigmaaldrich Belediyesi	S7653 Serisi
NaH2PO4	Sigmaaldrich Belediyesi	S8282 Serisi
NaHCO3	Sigmaaldrich Belediyesi	S5761 Serisi
tuzlu	Sıhhiye	Na
Kendinden tutucu ekartörler	Na	Na
Süper yapıştırıcı	Na	Na
Cerrahi kavisli makas	Na	Na
Cerrahi havlu kelepçeleri	Na	Na

Serisi Serisi Haber Bülteni Serisi Serisi Serisi )