Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Tavşanların kısıtlayıcılara alışmasını ve araştırmacının kardiyorespiratuar hızların stabilizasyonunu objektif olarak doğrulamasını sağlamak için, tüm tavşanları kardiyorespiratuar ve nöronal sensörlerle alet edin ve hayvan başına > 1 saat, 1 - 3 kez sürekli video izleme gerçekleştirin.
2. İntravenöz ilaç deneyi (Pentiletetrazol, PTZ)
- Marjinal kulak damarını görselleştirmek için tavşan kulağının arka yüzeyini tıraş edin. Bölgeyi dezenfekte etmek ve marjinal kulak damarını genişletmek için% 70 etanollü bir mendil kullanın. Bu, Şekil 1F'deki siyah kesikli oval ile gösterilmiştir.
- Bu noktada, prosedürün tavşana olan stresini azaltmak için bir deneycinin tavşanın yüzünü eliyle kapatmasını sağlayın. İkinci bir deneyci, marjinal kulak damarını steril bir 25-G anjiyokateter ile dikkatlice kanüle eder.
- Kateter damarın içine girdikten sonra, kateterin ucuna steril bir enjeksiyon tapası yerleştirin, böylece bir iğne ilacı intravenöz olarak sokabilir. Enjeksiyon tapasının yeri Şekil 1G'de mavi bir daire ile gösterilmiştir.
- 4 x 4 inç gazlı bezi bantla sararak bir tüp şekli oluşturacak şekilde bir atel yapın ve tavşanın kulağının içine yerleştirin. Daha sonra ateli kulağa bantlayın, böylece kateter yerine sabitlenir ve kateterize edilmemiş kulağa benzer şekilde dik kalır.
- Her mL heparinize salin başına 1 mL 10 USP birimi enjekte edin.
not: Kateter ve damar gözle görülür şekilde havadan arındırılmalı ve patent olarak kalmalıdır. Kateter damar içinde değilse, şırınga kolayca itilmeyecek ve cilt altı dokuda salin birikimi olacaktır.
- Tavşanlara her 10 dakikada bir 1 mg / kg'lık artışlarla intravenöz olarak 1 mg / kg ila 10 mg / kg arasında artan PTZ dozları verin. Hangi hayvanın enjekte edildiğini ve ilacın konsantrasyonunu belirtmek için her dozun başında bir not alın.
not: Bu, PTZ uygulamasının akut ve ilave etkilerinin değerlendirilmesini sağlar. Alternatif olarak, düşük doz PTZ'nin kronik etkilerini daha fazla değerlendirmek için, tavşana her düşük doz konsantrasyonunda tekrarlanan dozlar, 2 mg / kg'da 7 doz, 5 mg / kg'da 3 doz, daha sonra 10 mg / kg'da 3 doz, her doz 10 dakika ayrılır.
- Her dozdan sonra, herhangi bir nöro-kardiyak, elektriksel ve solunum anormalliği ve epileptiform aktivitenin görsel kanıtı için video-EEG-EKG-kapnografi-oksimetreyi dikkatlice izleyin. Bu değişiklikleri gerçek zamanlı olarak ve analiz sonrası olarak not edin.
not: Nöbet aktivitesi genellikle PTZ uygulamasından sonraki 60 saniye içinde başlar.
