Korneoskleral Düğme İzolasyonu: Domuz Gözünden Korneoskleral Düğme Elde Etmek İçin Yapılan Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: Okurowska, K., et al. Bakteriyel Keratitlere Karşı İlaç Tedavilerini İncelemek için Domuz Ex Vivo Kornea Modelinin Oluşturulması. J. Vis. Uzm. (2020).

Bu videoda, bir ex vivo domuz korneası modeli oluşturmak için korneoskleral düğmeyi cerrahi olarak izole etmek için bir prosedür gösteriyoruz. Model, insan gözüne benzerliği nedeniyle histolojik, patolojik ve farmakolojik çalışmalar için yardımcıdır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Sterilizasyon

1. KRİTİK ADIM: Distel'in %5 (h/h) solüsyonunda 1 saat boyunca damıtılmış suda bekleterek tüm forseps ve makasları dezenfekte edin, bir fırça ile temizleyin, musluk suyuyla durulayın ve 185 ° C'de bir fırında en az 2 saat sterilize edin.
2. Diğer tüm cam malzemeleri ve reaktifleri 121 °C'de 15 dakika otoklavlayarak sterilize edin veya reaktifleri üreticinin talimatlarına göre hazırlayın. Sınıf II mikrobiyoloji güvenlik kabininde aşağıdaki prosedürleri gerçekleştirin.

2. Örnek toplama

1. Domuz gözlerinin toplanması
   1. Büyük beyaz landrace dişi domuzlar, Hampshire domuzu ile bir haç kullanıldı. Hayvanlar bir elektrik akımı ile sersemletildi ve gözler 2 saat sonra mezbahada enüklee edildi.
   2. KRİTİK ADIM: Enükleasyondan sonra, kurumasını önlemek için gözleri steril fosfat tamponlu salin (PBS) solüsyonunda laboratuvara aktarın ve varışta hemen işleyin.

3. Korneoskleral düğmenin hazırlanması

1. Göz küresini çevreleyen dokuyu tutmak için steril forseps kullanın ve bir Petri kabına aktarın. 15 numaralı neşter bıçağı ve forseps kullanarak bir Petri kabı üzerindeki göz küresinin etrafındaki konjonktiva ve kas dokusunu çıkarın.
2. Optik siniri forseps ile tutarken göz küresini nazikçe kaldırın ve steril PBS ile doldurulmuş 0,5 L'lik bir kavanoza aktarın.
3. Tüm gözler çevredeki dokudan temizlendikten sonra, steril forseps kullanarak PBS'de %3 (h/h) povidon iyot ile doldurulmuş 0,5 L'lik başka bir kavanoza taşıyın ve 1 dakika bekletin.
4. Gözbebeklerini steril PBS ile başka bir 0,5 L'lik kavanoza aktarın.
5. Gözü bir Petri kabı üzerinde sabit tutmak için forseps kullanın ve 10A numaralı bir neşter bıçağı ile korneanın yakınında bir kesim yapın.
6. KRİTİK ADIM: Kesiğin kenarını tutun ve korneayı çevreleyen yaklaşık 3 mm sklera bırakarak korneayı çıkarmak için makas kullanın. Makasın keskin ucunun irisi veya koroid dokusunu delmediğinden ve supra-koroidal boşlukta olduğundan emin olun.
7. Korneoskleral düğmeyi forseps ile tutun ve uvea dokusunu nazikçe ayırmak için başka bir çift sivri uçlu forseps kullanın.
8. Korneoskleral düğmeyi kalan küreden kaldırın ve 12 oyuklu bir plakada PBS'de% 1.5 (h / h) povidon iyot çözeltisi içinde kısaca durulayın.
9. Korneoskleral düğmeyi steril PBS ile doldurulmuş başka bir 12 oyuklu plakaya yerleştirin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Cellstar 12 kuyulu plaka	Greiner Bio-Bir	665180
Dağıtım	Balıkçı Bilimsel	12899357
Forseps	Balıkçı Bilimsel	15307805
Pbs	Sls	P4417 Serisi
Petri kabı	Balıkçı Bilimsel	12664785
Povidon iyot	Weldricks eczanesi	2122828
Neşter bıçağı numarası 15	Balıkçı Bilimsel	O305
Neşter Swann Morton	Balıkçı Bilimsel	11849002

Serisi