Domuz bronşiolar doku ekstraksiyonu: Domuz akciğerlerinden bronşiolar doku kesitlerini incelemek için bir prosedür

Özet

Kaynak: Harrington, N. E. ve ark. Kistik Fibrozis Akciğerinde Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus Biyofilmlerinin Ex vivo Modelinde Antibiyotik Etkinlik Testi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, alınan domuz akciğerinden bronşiolar dokuları çıkarmak için uygulanan cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz. Ex vivo bronşiolar doku, kronik akciğer enfeksiyonlarını incelemek için enfeksiyon modelleri geliştirmek için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Ex vivo domuz akciğer (EVPL) dokusunun diseksiyonu

1. Kesimden sonra mümkün olan en kısa sürede belirlenen kaynaktan akciğerleri alın ve ev tipi bir soğuk kutuda laboratuvara taşıyarak soğuk tutulmalarını sağlayın.
   not: Kesim gününe daha yakın akciğerler depolamadan daha az morarma gösterir, ancak kesimden itibaren 4 güne kadar soğuk hava deposunda tutulan dokular da kullanılabilir. Soğutma kutusunun kasap dükkanına veya mezbahaya götürülmesi gerektiğinden, kontaminasyon riskini ve muhafaza ihlali riskini azaltmak için her kullanımdan sonra yerel laboratuvar yönergelerine göre dekontamine edilmeli ve kullanılmadığında mikrobiyoloji laboratuvarının dışında saklanmalıdır.
2. Sterilize edilmiş bir yüzey üzerinde ve alev altında çalışarak, akciğerleri otoklavlanmış alüminyum folyo ile kaplı temiz bir plastik doğrama tahtası üzerine yerleştirin. Bronşiyollerin sağlam kaldığını kontrol edin. Mezbahada veya taşıma sırasında herhangi bir hasar meydana gelmişse, akciğerler kullanıma uygun değildir.
3. Bir palet bıçağını alev altında ısıtın ve dokunun yüzeyini sterilize etmek için bıçağı bronşitolü çevreleyen akciğer bölgesine çok kısa bir süre dokundurun.
4. Steril monte edilmiş bir tıraş bıçağı kullanarak bronşitolü çevreleyen yüzey dokusunu kesin. Herhangi bir hasarı önlemek için bronşiyola paralel kesiler yapın.
5. Bronşiyol açığa çıktıktan sonra, bronşiolü serbest bırakmak için görünür en yüksek noktada bronşiyol boyunca kesitsel bir kesi yapın.
6. Steril forseps kullanarak, bronşiolün serbest ucunu hafifçe tutun ve steril monte edilmiş bir tıraş bıçağı kullanarak kalan istenmeyen dokuları kesin. Bronşitolü akciğerlerden çıkarmak için herhangi bir dallanma görünmeden önce bronşiyol boyunca son bir kesitsel kesi yapın.
7. Bronşiyolu ilk DMEM / RPMI 1640 yıkamasına yerleştirin. Bronşiolü yıkamada bırakın ve yeterli doku kesiti elde etmek için aynı akciğerden gerektiği kadar bronşiyol ek bölümleri toplamak için 1.2-1.5 adımlarını tekrarlayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Yüzey sterilizasyonu ve flamin gof diseksiyon ekipmanı için% 70 etanol veya benzeri
Alüminyum folyo - otoklavlama ile önceden sterilize edilmiş - akciğerleri inceleyeceğiniz doğrama tahtasını kaplamak için
Bunsen brülör
Doğrama tahtası - alkolle kolay dekontaminasyon sağlamak için plastik bir tahta öneririz.
Akciğerleri laboratuvara taşımak için coolbox
Farklı boyutlarda diseksiyon makası
Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM)
Fisherbrand 2 mL takviyeli tüpler	Termo Balıkçı	15545809
Büyük palet bıçağı
Monte edilmiş tıraş bıçakları
Steril ve temizlenebilir bir diseksiyon yüzeyi oluşturmak için plastik doğrama tahtası ve alüminyum folyo
Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 orta
Forseps seçimi (künt uçlar önerilir)
Kurumunuzun sağlık ve güvenlik politikalarına uygun olarak kontamine kesici delici aletlerin ve domuz dokusunun atılması için uygun kaplar.