$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Doku diseksiyonu
- Steril olmayan diseksiyon çalışma alanını kullanarak domuz dokusunu hazırlayın.
- Yerel bir mezbahadan, hayvan çalışmalarından veya satıcıdan enükleasyonlu domuz gözleri temin edin. Teslimat sırasında gözleri PBS'ye batırılmış buz üzerinde tutun ve aldıktan hemen sonra kullanın.
- Ekstraorbital dokuyu kesin ve konjonktivayı kesin, geriye sadece korneoskleral kabuk ve optik sinir kalır. Diseksiyonu steril olmayan koşullar altında, büyük bir cerrahi makas ve forseps ile brüt diseksiyon alet paketinde gerçekleştirin.
- Deney kurulumu için gerekli tüm gözler ön/brüt diseke edilene kadar gözleri buz üzerinde taze PBS'ye geri yerleştirin.
- Gözleri kapalı kaplarda 2 dakika boyunca% 10 betadin çözeltisine batırın ve mikrodiseksiyon için aseptik olarak BSC II kabinine aktarın (kabin # 1). Kurulum sırasında kontaminasyonu en aza indirmek için sonraki tüm çalışmaları steril koşullar altında gerçekleştirin.
- Ön segmentleri steril olarak inceleyin.
- Betadin solüsyonunda 2 dakika sonra, oküler dokunun sterilitesini korurken oküler yüzeyden fazla betadin solüsyonunu çıkarmak için gözleri üç seri steril 1x Antibiyotik-Antimikotik-PBS (AA-PBS) yıkamasına aktarın. Üç yıkamadan sonra, daha fazla kullanana kadar dokuyu AA-PBS'de tutun.
- Jilet/neşter ve kavisli makas kullanarak gözü kesin. Gözü AA-PBS ile ıslatılmış bir gazlı bez üzerine yerleştirin ve gözün ekvatorunun yakınında steril bir tıraş bıçağı veya neşter ile bir kesi oluşturun (ön tarafta 40 ile 60/40 bölünmüş). Kavisli cerrahi makas kullanarak, ön gözü (kornea yarısı) izole etmek için gözü yarım.
not: Organ kültüründe kurulumdan sonra sıvı sızıntıları yaratacak sklerada pürüzlü, pürüzlü kenarları önlemek için ön segment etrafındaki kesiğin sürekli olması gerekir.
- Ön segmentten vitreus mizahını almak için kürek olarak mikro makas kullanın. Mikromakas kullanarak lensi ön segmentten çıkarın. Daha ileri diseksiyon adımlarına kadar ön segmentleri AA-PBS'de bırakın.
not: Diseke edilecek tüm gözler bu adımda tutulabilir ve diseksiyon işleminin geri kalanı boyunca tek tek alınabilir.
- Diseksiyon mikroskobu ile, trabeküler ağ (TM) görünene kadar irisi kademeli olarak, radyal olarak iris köküne geri kesin. TM, korneoskleral kabuk etrafında çevresel olarak yönlendirilmiş liflerden oluşan pigmentli bir dokudur. İrisin iris köküne doğru dikkatli bir şekilde kesilmesi, doku altındaki TM'nin derinliğini ortaya çıkaracaktır.
- Tüm TM bölgesini ortaya çıkarmak için irisin etrafını dokuya ilk kesikle aynı derinlikte 360° kesin. TM'yi kaplayan kalan kalıntı irisi gerektiği gibi temizleyin.
- TM'nin arkasındaki siliyer cisim kalıntılarını kesin ve TM bölgesinin arkasında sadece ince bir doku bandı bırakın (yaklaşık 1 mm).
- Disseke edilmiş ön segmenti (AS), çanak tertibatı BSC II kabininde (kabin #2) ön segment organ kültüründe (ASOC) daha fazla kurulum yapılana kadar ortama yerleştirin.
not: Tek bir kullanıcı diseksiyon ve organ kültürü çanağı montajı yapıyorsa, ASOC kurulumundan önce tüm gözler bu noktada tutulabilir.