Tavşan Karaciğer Karsinomu Modelinin Oluşturulması: Hepatosellüler Karsinomun İndüksiyonu için Karaciğerin Sol Lobuna Tümör Dokusu İmplante Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: Khabbaz, R. C. et al. Karaciğer Kanseri için Tavşan VX2 Modelinin Geliştirilmesi ve Anjiyografik Kullanımı. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, hepatosellüler karsinomu indüklemek için tümör dokusunun bir tavşan karaciğerine cerrahi implantasyonunu gösteriyoruz. Prosedür, tümör davranışını ve karaciğer kanserlerini hedef alan lokorejyonel tedavilerin geliştirilmesini incelemek için güvenilir bir hayvan modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Laparotomi ile Karaciğer Tümörü İmplantasyonu

1. Alıcı tavşanı laparotomi için hazırlayın. İndüksiyon için 45 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin kullanarak alıcı tavşanı uyuşturun, ardından entübasyon ve gerektiği gibi% 1-3% izofluran ile idame edin. Tavşan uyuşturulduğunda, saç kesme makinesi kullanarak ameliyat bölgesini tıraş edin. Kesi alanını betadin ovma,% 70 etanol çözeltisi ve betadin çözeltisi ile üçlü yıkama kullanarak temizleyin ve karnı steril bir cerrahi şekilde örtün.
2. # 15 bıçaklı bir bıçak kullanarak, ksifoid işleminden başlayarak tavşanın derisi boyunca aşağı doğru dikey bir orta hat kesisi yaparak laparotomiyi başlatın. Bu kolayca palpe edilmelidir ve kabaca bir Amerikan kuruşunun büyüklüğü olma eğilimindedir. Şekil 1'e bakın.
3. Cildi yansıtın ve linea alba'yı tanımlayın. Bu, orta hatta aşağı doğru hareket eden yansıtıcı beyaz bir doku bandı olmalıdır. Linea alba'yı geçmek ve peritonu ortaya çıkarmak için künt diseksiyon kullanın. Şekil 2'ye bakın.
   not: Periton, solunumla hareket ederken görülebilen bağırsağın doğrudan üzerinde olacağından kolayca tanımlanır.
   Dikkat: Periton, yüzey gerilimi nedeniyle alttaki bağırsağa yapışma eğilimindedir. Linea alba'yı incelemek için künt travma kullanmak, altta yatan bağırsağın delinmesi riskini dağıtmaya yardımcı olur.
4. Periton açığa çıktıktan sonra, periton boşluğuna girmek için dikkatlice inceleyin. Karaciğer artık tanımlanabilir. Karın boşluğunda daha iyi gezinmek için, orta hat kesisini cilt, kas ve periton boyunca 1\u20122 cm aşağıya doğru uzatın.
   not: Orta hat insizyonunun uzatılması, kavisli bir kanama durdurucunun, kavisli uç yüzeysel olarak peritonea bakacak şekilde periton boşluğuna dikkatlice yerleştirilmesiyle kolay ve güvenli bir şekilde yapılabilir. Daha sonra kanama durdurucuyu hafifçe açın ve kanama durdurucunun iki kolu arasındaki dokuyu kesmek için bir bıçak kullanın.
5. Tümör implantasyonu için bir yer seçmek için karaciğerin sol lobunu tanımlayın. Sol lob, orta hatta yer alan medial lobun infero-lateraldir.
6. Karaciğeri periton boşluğundan çıkarmaya çalışmadan önce, insizyonun alt yönüne kuru bir gazlı bez parçası yerleştirin.
   not: Gazlı bez, karaciğerin karın içine geri çekilmesini önlemek için karaciğeri yerleştirmek için yapışkan bir yüzey sağlayacaktır.
7. Parmakların üzerinde atravmatik forseps veya bir parça ıslak gazlı bez kullanarak, karaciğerin sol lobunu kesiden karın içinden dikkatlice çekin ve daha önce yerleştirilen kuru gazlı bezin üzerine yatırın. Şekil 3'e bakın.
   Dikkat: Karaciğer kapsülü hassastır ve kolayca yırtılabilir. Kapsül kanamasını, karaciğer morarmasını ve/veya nihai hemoperitonu önlemek için bu organı tutarken nazik olmak çok önemlidir.
   not: Genellikle, karaciğer peritoneal boşluğa girdikten sonra görsel olarak kendini ilan eder; Bununla birlikte, tavşanın midesi şişerse, karaciğer kraniyal olarak gözden uzak bir yere itilebilir. Bu durumda, künt bir prob kullanarak karın duvarını nazikçe kaldırın. Bu senaryoda, karaciğer yüzey gerilimi nedeniyle diyaframın ventral yönüne yapışma eğilimindedir, bu nedenle künt bir prob kullanarak karaciğeri dikkatlice ayırın ve ayrılması gerekir. Daha sonra karaciğeri çıkarmak için atravmatik forseps kullanın.
8. Bu noktada, tümör dokusunu implantasyon için hazırlayın ve korumak için karaciğerin üzerine bir parça ıslak gazlı bez yerleştirin.
9. Karaciğere implantasyon için 1\u20122 mm³ parça önceden işlenmiş tümör dokusu seçin. Şekil 4'e bakın.
10. # 11 bıçak kullanarak, karaciğer kapsülünün dorsal yönüne nüfuz etmemeye dikkat ederek, 0,5 cm derinliğinde bir cep oluşturarak karaciğer dokusunu 45 ° 'lik bir açıyla delin. Delme işlemini yaptıktan sonra bıçağı yerinde bırakın. Şekil 5'e bakın.
11. Karaciğer yatağında küçük bir cep oluşturmak için bıçağı ventral yönde yavaşça kaldırın. Forseps kullanarak tümör parçasını alın, tümör parçasını bu cebe yerleştirin ve ardından bıçağı çıkarın.
    not: Bıçak, tümör parçasını yerleştirmeden önce çıkarılabilir, ancak karaciğer kanar ve bu, delinme bölgesini gizleyerek tanımlamayı zorlaştırabilir.
    Dikkat: İstenmeyen tümör tohumlamasını önlemek için tümörün diğer yapılarla temasını en aza indirdiğinizden emin olun. Bu, daha sonra implantasyona yardımcı olmak için kullanılan herhangi bir aleti bir kenara bırakarak da önlenebilir.
12. Bu noktada, hemostazı teşvik etmek ve tümör parçasının dışarı atılmasını önlemek için tümör cebinin üzerine jel köpük gibi bir parça hemostatik ajan yerleştirin.
13. Hemostaz onaylandıktan sonra karaciğeri karın bölgesine geri koyun.
14. Karın duvarını basit bir sürekli dikiş kullanarak konik bir iğne üzerinde 3-0 polidioksanon sütür ile kapatın ve cildi sürekli subkutiküler dikiş kullanarak bir kesme iğnesi üzerinde 4-0 poliglaktin 910 sütür ile kapatın.
    Dikkat: Karın duvarını kapatırken dikiş atışında omentuma veya diğer bağırsak yapılarına zarar vermemeye özen gösterin.

Sonuçlar

Şekil 1: Açığa çıkan ksifoid süreci. Deri ve alttaki kas, ksifoid sürecinin (siyah ok) ve bağırsağın (beyaz ok) görselleştirilmesine izin vermek için yansıtılmıştır. Beyaz yıldız kafatası yönünü gösterir.

Resim 2: Linea alba. Üstteki cilt ve fasya, krani...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Saç kesme makineleri	Ayhan	41870-0438
Ketamin	Henry Schein	56344
Ksilazin	Akorn Belediyesi	59399-110-20
Kavisli Kanama Durdurucu	TEFE	501288
Atravmatik Forseps	Sklar	52-5077
Gazlı bez	Medline (Medline)	NON21430LF
15 Bıçaklı	Steris Belediyesi	02-050-015
11 Bıçaklı	Steris Belediyesi	02-050-011
Cerrahi	Etik	1951
3-0 PDS/Konik	Etik	Z305H
4-0 Vicryl/Kesme	Etik	J392H

Yılı