Bir at donörünün eklemlerinden eklem kıkırdağının toplanması: bir at donörünün kadavra eklemlerinden vasküler bağ dokusunu izole etmek için cerrahi bir prosedür

Özet

Kaynak: Benders, K. E. M. et al. Selülozdan Arındırılmış Kıkırdak Türevi Matris İskelelerin İmalatı. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, bir at kadavra ekleminden eklem kıkırdağının çıkarılmasını gösteriyoruz. İzole edilmiş eklem kıkırdağı, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir

.

1. Donör (Kadavra) Eklemlerinden Eklem Kıkırdağı Alınması

1. Hasat adımından önce, 100 U / mL penisilin, 100 μg / mL streptomisin ve% 1 (h / h) Amfoterisin B ile desteklenmiş steril fosfat tamponlu salin (PBS) içeren 1 L kıkırdak yıkama solüsyonu hazırlayın.
2. Donör patojenleri taşıyabileceğinden, tüm hasat prosedürü boyunca eldiven ve laboratuvar önlüğü giyin.
3. Kıkırdak izolasyonu için sağlam (kadavra) bir eklem edinin.
   not: Bu noktada, eklem etrafındaki deri hala sağlamdır. Bu protokolde attan elde edilen at boğucu kıkırdak kullanılmıştır, ancak diğer türlerden diğer eklemler de kullanılabilir.
4. Bir neşter ve cerrahi bir cımbız kullanarak ilgilenilen eklem bölgesinin etrafında bulunan cildi çıkarın. Ek olarak, gerekirse alttaki ekleme zarar vermeden fazla yağ ve kas dokusunu çıkarın. İsteğe bağlı olarak hazırlanan kadavrayı biyolojik güvenlik kabinine aktarın.
5. Bir artrotomi, yani eklemin ayrılması yapmak için, önce eklemin ekstansiyonunu ve fleksiyonunu gerçekleştirerek eklemin eklemlendiği yeri tanımlayın.
6. Eklem bölgesini açmak için bir neşter ve cerrahi cımbızla daha fazla yağ, kas ve tendon katmanını dikkatlice çıkarın.
7. Eklem boşluğuna ulaşmak için bir kesi yapın.
   not: Eklem boşluğu, doğru bir insizyon yapılırken boşluktan damlayabilen sinovyal sıvı ile doldurulur.
8. Eklemi bir arada tutan tendonları keserek eklemi tamamen açmaya devam edin.
9. Kıkırdakta herhangi bir makroskopik hasar olup olmadığını kontrol edin.
   NOT: Eklem kıkırdağı parlak ve pürüzsüz bir görünüme sahip değilse veya belirgin kabarma, yarıklar veya kusurlar varsa, kıkırdağı atın.
10. Kıkırdağı subkondral kemikten çıkarmak için steril bir neşter kullanın. Kıkırdağın derin bölgesini de çıkarmak için subkondral kemiğe kadar kesin (Şekil 1). Kıkırdağın kurumasını önlemek için, kıkırdak üzerine düzenli olarak kıkırdak yıkama solüsyonu damlatın.
    not: Şu anda, kıkırdak dilimlerinin boyutu önemli değildir.
11. Kıkırdak dilimlerini önceden hazırlanmış kıkırdak yıkama solüsyonu içeren 50 mL'lik tüplerde toplayın (Şekil 2A).
12. İlgilenilen tüm alanlardan kıkırdak topladıktan sonra, kıkırdak dilimlerini 5 dakika boyunca sıvı nitrojen içinde dondurun.
13. Kıkırdak dilimlerini 50 mL'lik tüplere aktarın ve kıkırdak dilimlerini hemen bir dondurarak kurutucuda 24 saat liyofilize edin. Buz kondansatörü -51 °C iken dondurarak kurutucuyu yaklaşık 0,090 mbar'a ayarlayın (Şekil 2B).
14. Kıkırdak dilimlerini daha fazla kullanana kadar oda sıcaklığında kuru bir yerde saklayın.

Sonuçlar

Şekil 1: Tam kalınlıkta kıkırdak çıkarıldıktan sonra at dizi. Neşter kullanılarak kesilemeyen kireçlenmiş kıkırdak tabakasına ulaşılana kadar neşter kullanılarak kıkırdak kondillerden çıkarılır.

Şekil 2: Decellularized kıkırdak t...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kadavra eklemi			Bu, yerel kasaptan veya veterinerlik merkezinden dinlenme materyali olarak temin edilebilir.
Steril fosfat tamponlu salin (PBS)
Penisilin-Streptomisin	Gibco (Gibco)	15140
Amfoterisin B	Thermo Fischer Bilimsel	15290026
Sıvı nitrojen
Dondurarak kurutucu	SALMENKIPP	ALFA 1-2 LD artı
Santrifüj (50 mL tüpler için)	Eppendorf Belediyesi	5810R
neşter
Neşter tutucu
Küçük eyer

Serisi