Domuz Aort İzolasyonu: Aşağı Akış Analizi için Minyatür Domuzlardan Torasik Aortu Eksize Etmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Bu makalede

Özet

Kaynak: Zhao, Y., et al. Minyatür Domuzlardan Primer Aort Endotel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, aortun minyatür domuzlardan cerrahi olarak çıkarılması için bir prosedür gösteriyoruz. Bu izole aortlardan toplanan endotel hücreleri, pıhtılaşma ve immün tepkileri incelemek için in vitro koşullarda daha fazla kültürlenebilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Domuz aort endotel hücresi izolasyonu için cerrahi ve hazırlık

Ameliyat öncesi ameliyathanenin 1 saat UV ışığı ve tıbbi dezenfektan 84 sıvı (mevcut klor içeriği %4.0 - %5.0, Malzeme Tablosu) ile dezenfekte edilmesi.
Minyatür domuz, 15 mg / kg Ketamin, 15 mg / kg Ksilazin hidroklorür ve 0.05 mg / kg Fenasetin hidroklorür (Hacimler: 100μL / kg, Malzeme Tablosu) (Şekil 1A) ile oluşturulan kas içi bir enjeksiyon aldıktan sonra, domuz ağrılı uyaranını (örn. bir kulağı sıkmak veya bir ön ayağı sallamak) ve fizyolojik indeksi (örn. kan basıncı, kalp ve solunum hızı).
not: Uyanma belirtileri gösteriyorsa domuza başka bir yarım doz enjeksiyon yapılabilir.
Karnı bir neşter ile kesin, inferior vena kava'yı açığa çıkarın ve sonuç olarak heparin sodyum (5.000 U, Malzeme Tablosu) 5 mL şırınga ile inferior vena kavaya enjekte edin.
Beş dakika sonra, abdominal aorta kana bir kateter yerleştirin, göğüs derisini kesin ve diyaframı bir neşter ile kesin ve ardından sol ventrikülü kesin.
not: Kanlandıktan ve kalbi kestikten sonra aort nabzını kontrol ederek domuzun ötenazi yapıldığından emin olun.
Kaburgaları kemik forseps ile eksize edin (Malzeme Tablosu) ve kalbi ve akciğerleri açığa çıkarın. Kalbin ve akciğerlerin arkasındaki aortu bulun ve iki ucunu klempleyin. Aortu önceden soğutulmuş yıkama tamponu ile bir kez yıkayın - 1x PBS çözeltisi (pH 7.4)% 1 (h / h) Penisilin / Streptomisin ile. (Şekil 1B,C).
Aortu makasla kesin ve aortu her iki ucundan klempli tutun. Steril forseps ve makasla aort çevresindeki fazla dokuyu çıkarın. Aortu 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun, aortu önceden soğutulmuş yıkama tamponu 3x (yıkama başına 30 mL) ile yıkayın ve aortu laboratuvara aktarın (Şekil 1D).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1: Minyatür bir domuzdan aortun cerrahi prosedürü ve eksizyonu. (A) Minyatür bir domuzun (Bama) fotoğrafı. (B) Laparotomi ve torakotomi sonrası aort açığa çıkar. (C) Aort her iki ucundan klemplenir. (D) Aort, soğuk yıkama tamponu olan 50 mL'lik bir tüpe yerleştirilir.