$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Kısa Posterior Siliyer Arterlerin İzolasyonu
Domuz gözleri, optik sinir ve ekstraoküler dokularla birlikte mortem hemen sonra elde edildi. Enükleasyonlu gözler buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin (PBS) içinde laboratuvara taşındı ve hemen kullanıldı.
NOT: Domuz gözü temel olarak ön (Şekil 1A) ve arka bölümlere (Şekil 1B) ayrılmıştır.
- Göz küresini buz gibi soğuk Krebs-Henseleit (KH) tamponu içeren bir diseksiyon odasına yerleştirin. Bir çift keskin Mayonez makası ile çevredeki kas ve dokuları dikkatlice kesin.
not: Krebs-Henseleit (KH) tamponunu hazırlamak için, aşağıdaki kimyasalları (27.68 g NaCl, 8.4 g NaHCO 3,1.4 g KCl, 1.18 g MgS04 ve 0.64 g KH2PO4) kuru ve temiz bir 50 mL konik santrifüj tüpüne ve 1.47 g CaCl2 ve 8.0 g glikozu başka bir tüpe tartın. Bu kimyasalların toz karışımı serin ve kuru bir yerde saklanmalıdır. CaCl2 ve glikoz tozu karışımı, nemin emilmesini ve topaklanmayı önlemek için en iyi şekilde taze olarak hazırlanır.
- Bir neşter ile bir kesi yapın ve göz ön ve arka yarıya ayrılana kadar bir çift keskin Mayo makasıyla ekvator düzlemi boyunca küreyi kesin. Bir çift standart desen forseps kullanarak gözün arka yarısından mümkün olduğunca fazla vitreus cismi çıkarın.
not: Göz küresinin ikiye ayrılması, diseksiyon kabında hareket eden bir göz olmadan kısa posterior siliyer arterlerin (sPCA) kolaylıkla izolasyonunu kolaylaştırır. Ancak, bu adım zorunlu değildir. Damarlar, göz küresi açılmadan da izole edilebilir.
- Gözün arka yarısını, retina tarafı aşağı bakacak ve optik sinir deneyi yapan kişiye doğru bakacak şekilde dikkatlice sabitlemek için diseksiyon pimleri kullanın.
- Altta yatan retrobulbar damar sistemini ortaya çıkarmak için optik siniri çevreleyen bağ dokularını bir çift Student Vannas yaylı makasla nazikçe kesin.
- sPCA, skleraya nüfuz eden ve optik sinir başını çevresel olarak çevreleyen kısa damar dalları (5-8 dal arasında) olarak görülebilir (Şekil 1C). Paraoptik ve distal sPCA'yı çevredeki bağ dokuları ile birlikte bir çift tip 5 hassas cımbız ve Vannas kapsülotomi makası ile izole edin (Şekil 1D).
not: İzolasyon prosedürü boyunca KH tamponunun buz gibi soğuk kaldığından emin olun. Ortam sıcaklığına bağlı olarak tamponun her 20-30 dakikada bir değiştirilmesi şiddetle tavsiye edilir.
2. Numune Hazırlama
- Stereomikroskop altında ekstra ince uçlu tip 5 hassas cımbız ve Vannas kapsülotomi makası kullanarak arteriyel segmentlerdeki bağ dokularını nazikçe çıkarın ve kirleticileri ve kan kalıntılarını gidermek için izole edilmiş arterleri buz gibi soğuk PBS'de durulayın.
not: Numuneler hemen sonraki adımlara tabi tutulmazsa, sıvı nitrojen içinde dondurun ve daha fazla kullanılana kadar -80 °C'de saklayın.
