Tavşan Embriyosu Çözdürme: Embriyo Transferi için Dondurularak Saklanmış Tavşan Embriyolarını Geri Kazanmak İçin Bir Isınma Prosedürü

Özet

Kaynak: Garcia-Dominguez, X. et al., Tavşan Modelinde Optimal Embriyo Aşamasında Minimal İnvaziv Embriyo Transferi ve Embriyo Vitrifikasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, vitrifiye tavşan embriyolarının çözülme prosedürünü ve optimal embriyo geri kazanımı için önlem ölçüm adımlarını göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Embriyo Isınması

1. Embriyoları tek bir adımda çözün.
   1. Mini pipeti sıvı nitrojen buharından 10-20 s boyunca 30 cm yatay olarak yerleştirin.
   2. Mini pipetin içinde kristalleşme süreci başladığında, mini pipeti 25°C'de 10-15 saniye su banyosuna daldırın.
   3. Mini pipet tapasını çıkarın ve pamuklu tapayı kesin.
   4. Birleştirilmiş bir mikro dağıtıcı ile, tüm mini saman içeriğini 5 dakika boyunca BM'de 25 ° C'de 0,33 M sükroz çözeltisi içeren bir plakaya boşaltın.
      not: Embriyonun vitrifikasyon çözeltisine maruz kalmasını azaltmak için bu adım hızlı bir şekilde yapılmalıdır.
   5. Embriyoları 5 dakika daha BM çözeltisi içeren yeni bir plakaya taşıyın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Sıvı Azot	Hava Sıvısı,	P1505XXX
Petri kapları, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Plastik pansuman (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Plastik Pipet 0.25 mL	IMV - teknolojiler	6431
makas	ROBOZ	RS-5880	Herhangi bir normal cerrahi sınıf çelik küçük düz makas işe yarayacaktır.
Steril Eldivenler	Alvet Escartí	087GL010075
Steril önlük	Alvet Escartí	12261501
Steril maske	Alvet Escartí	058B15924B
Saman Tapası	IMV - teknolojiler	6431
Sakaroz	Sigma Aldrich	S7903 Serisi
Su banyosu	RAYPA (RAYPA	BAE-4
Dulbecco'nun fosfat tamponlu tuzlu su (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773 Serisi	Kalsiyum klorür içermez.

· Haber Kaynağı Serisi Haber Kaynağı · ) Serisi ·