1. Yenidoğan fareleri subkutan enjeksiyonla P0.5-P2.5'te rAAV9 ile tedavi edin.
<ol>
	<li>29G1 / 2, 0.33 x 12.7 mm insülin şırıngasını rekombinant adeno ilişkili virüs 9 (rAAV9) çözeltisi ile önceden doldurun. Hava kabarcıklarını gidermeye dikkat edin.</li>
	<li>Kriyo anestezi uygulanmış yavruyu bir elinizle başparmağınız ve işaret parmağınızla tutun. Enjeksiyondan önce, steril durumu korumak için yavrunun arka derisini %70 izopropil alkole doyurulmuş bir çubukla kaydırın. Şırınga iğnesini hayvanın ön-dorsal subkutisine 5 ila 10 ° 'lik bir açıyla yerleştirin. İnsülin şırıngasını kullanarak 50-70 μl rAAV9 çözeltisi enjekte edin. 
	NOT: rAAV9, fareye intraperitoneal veya intravenöz enjeksiyon yoluyla da verilebilir. Kalpte iletilen genlerin verimli bir şekilde ifade edilmesi sağlanabilir. Bununla birlikte, intraperitoneal enjeksiyon bazen karaciğerde sızıntı ifadesine neden olabilir. Enjeksiyondan sonra yavruların durumu her gün izlendi.</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="her zaman">
	<tbody>
		<tr>
			<td>rAAV9 vektörü </td>
			<td>Penn Vektör Çekirdeği </td>
			<td>P1967 Serisi</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rekombinant adeno İlişkili virüs temelli gen dağıtımı: kemirgen modelinde transgen teslimi ve kardiyak spesifik İfade İçin bir teknik

Recombinant Adeno Associated Virus Based Gene Delivery: A Technique for Transgene Delivery and Cardiac-Specific Expression in Rodent Model

Kaynak: Ding, J. et al. <a href="https://www.jove.com/v/54787">Fare Kalplerinde Genleri Aşırı İfade Etmek veya Yıkmak için rAAV9'un Hazırlanması.</a> J. Vis. Uzm. (2016)
Bu videoda, fare yavrusunda rekombinant adeno ilişkili virüs bazlı gen iletimini gösteriyoruz. Bu yöntem, hedeflenen hücrelerde gen ekspresyonunun incelenmesine yardımcı olur.

Rekombinant Adeno İlişkili Virüs Temelli Gen Dağıtımı: Kemirgen Modelinde Transgen Teslimi ve Kardiyak Spesifik İfade İçin Bir Teknik

Kaynak: Ding, J. et al. Fare Kalplerinde Genleri Aşırı İfade Etmek veya Yıkmak için rAAV9'un Hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2016)
Bu videoda gösteriyoruz ...

Rekombinant adeno-ilişkili virüs, rAAV, belirli bir hücre tipini hedeflemek ve genetik yükünü gen ekspresyonu için konak hücre çekirdeğine taşımak için genetik olarak tasarlanmış küçük, tek sarmallı bir DNA virüsüdür.
Kriyo anestezi uygulanmış bir fare yavrusunu kısıtlayarak başlayın. Sırt cildini sterilize edin ve istenen transgeni kardiyak spesifik bir promotör boyunca taşıyan rAAV vektörünü deri altına enjekte edin. Vektör vasküler sistem tarafından emilir ve kalp de dahil olmak üzere uzak organlara ulaşır.
Burada, rekombinant virüs kardiyomiyositin yüzeyine yapışır ve endositoz yoluyla bir endozoma içselleştirilir. Endozom içinde, viral kapsid kısmen parçalanır ve viral litik proteinleri açığa çıkarır. Bu protein, vektörün sitoplazmaya kaçtığı endozomal zarda gözeneklere neden olur.
Vektör sitoplazmik mikrotübüller boyunca hareket eder ve nükleer gözenekten girer. Çekirdeğe girdikten sonra, viral kapsid genomunu serbest bırakmak için parçalarına ayrılır. Hedef geni taşıyan tek sarmallı DNA daha sonra çift sarmallı DNA'ya dönüştürülür.
DNA transkripsiyonunu takiben, üretilen mRNA sitoplazmaya hareket eder. Burada mRNA, kardiyomiyositlerdeki hedef proteini eksprese eden translasyona uğrar. Kalbe gen iletiminin verimliliğini ve doku özgüllüğünü belirlemek için floresan mikroskobu altında farklı organlardan alınan doku örneklerini gözlemleyin.

Viral titreyi metin protokolüne göre belirledikten sonra, mililitre başına 1-7 x 1012 parçacıklı virüs titreleri ile rAAV9 çalışma solüsyonları hazırlayın. Yenidoğan fareleri tedavi etmek için, 0.33 x 12.7 mililitrelik bir insülin şırıngasını 29 gauge 1/2 inçlik bir iğne ile önceden doldurmak için rAAV9 solüsyonunu kullanın ve hava kabarcıklarını önleyin.
Bir yavruyu kriyoanestezi uyguladıktan sonra, yavruyu bir elinizle başparmağınız ve işaret parmağınızla tutun. Ardından, %70 izopropil alkole doyurulmuş bir çubukla yavrunun arka derisini kaydırın. Şırınga iğnesini, 50 ila 70 mikrolitre rAAV9 çözeltisi enjekte etmeden önce hayvanın ön-dorsal subkutisine 5 ila 10 derecelik bir açıyla yerleştirin.

recombinant-adeno-associated-virus-based-gene-delivery-technique-for

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

Biyolojik Teknikler

Gene Transfer Techniques

Gen Aktarım Teknikleri

Transduction

Transdüksiyon

2.9K Görüntüleme. Rekombinant adeno-ilişkili virüs, rAAV, belirli bir hücre tipini hedeflemek ve genetik yükünü gen ekspresyonu için konak hücre çekirdeğine taşımak için genetik olarak tasarlanmış küçük, tek sarmallı bir DNA virüsüdür. Kriyo anestezi uygulanmış bir fare yavrusunu kısıtlayarak başlayın. Sırt cildini sterilize edin ve istenen transgeni kardiyak spesifik bir promotör boyunca taşıyan rAAV vektörünü deri altına enjekte edin. Vektör vasküler sistem taraf?...

Rekombinant Adeno İlişkili Virüs Temelli Gen Dağıtımı: Kemirgen Modelinde Transgen Teslimi ve Kardiyak Spesifik İfade İçin Bir Teknik

Bu makalede

Özet

Protokol

Açıklamalar

Malzemeler

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler