Lazer Destekli Lentiviral Gen Dağıtımı: Lentiviral Gen Dağıtımını Kolaylaştırmak için Fare Döllenmiş Yumurtalarını Geçirgen Hale Getirme Tekniği

Özet

Kaynak: Martin, N. P., et al. Fare Döllenmiş Yumurtalarına Lazer Destekli Lentiviral Gen İletimi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, lentiviral gen iletimini kolaylaştırmak için fare döllenmiş yumurtalarında zona pellucida'nın koruyucu tabakasının lazer destekli nüfuzunu gösteriyoruz. Lentivirus, genomlarına istikrarlı bir şekilde entegre edilmiş bir ilgi genine sahip transgenik hayvanların üretilmesini sağlar.

Protokol

1. Fare Döllenmiş Yumurtalarının XYClone Lazer ile Delinmesi

1. XYClone lazeri üreticinin tavsiyesine göre kurun ve kalibre edin. Tipik olarak in vitro fertilizasyon için kullanılan diğer lazerler, döllenmiş yumurtaları delmek için XYClone lazerin yerini alabilir.
   1. Lazer kontrol kutusu kablosunu mikroskop üzerindeki lazer aparatına takın.
   2. Lazer denetleyici kutusunu bir USB bağlantı noktası aracılığıyla lazer yazılımını çalıştıran bilgisayara takın. 3.1.3. Lazer denetleyiciyi prize takın ve açın.
   3. Göz merceğinden bakarak, bir test numunesini delin (örn. bir cam slayt üzerindeki kuru silme işaretleri).
   4. Lazerin....

Sonuçlar

Şekil 1: Fare döllenmiş yumurtalarının lazer tedavisi. Bir delik oluşturmak için zonanın delinmesine ve zonanın incelmesine ilişkin örnekler.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
CD510B-1 plazmidi	Sistem Biyobilimleri	CD510B-1	EF1a-copGFP eksprese eden lentivirüsü paketlemek için kullanılır
Dimetilpolisiloksan	Sigma	DMPS5X	Embriyoların kültürlenmesi
XYClone Lazer	Hamilton Thorne Biyobilimler		Fare Döllenmiş Yumurtaları Delmek
Ameliyatsız Embriyo Transferi (NSET) Cihazı	ParaTech'ler	60010	Embriyoların NSET'i
KSOM orta	Kırlangıç	BAY-020P-5F	Embriyoların kültürlenmesi
KSOM'un Bileşimi:			mg/100 mL
NaCl (Doğal)			555
Kartal			18,5
KH2PO4			4,75
MgSO4 7H2O			4,95
CaCl2 2H2O			25
NaHCO3			210
glikoz			3.6
Na-Piruvat			2.2
DL-Laktik Asit, sodyum tuzu			0,174 milyon
10 mM EDTA			100μL
Streptomisin			5
penisilin			6.3
% 0.5 fenol kırmızısı			0,1 milyon
L-Glutamin			14,6
MEM Esansiyel Amino Asitler			1 mL
MEM Gerekli olmayan AA			0,5 mL
Bsa			100

Serisi TL