$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Nil Kırmızısı Kullanılarak Nötr Lipidlerin Florometrik Miktar Tayini
NOT: Floresan okuması için 5 g/L'de sadece 10 μl'lik bir alg süspansiyonu gereklidir. Genel olarak, kuru alg biyokütlesinin 1.5 ml kültür suyundan izolasyonu fazlasıyla yeterlidir. Ayrıca, spektrofotometredeki lambanın ışık yoğunluğu zamanla bozulabilir. Cihazdaki değişikliklerin ölçümlere gereksiz hata eklememesini sağlamak için her deneye standartların dahil edilmesi önerilir.
- Alkol reaktifi dereceli etanol içinde çözülmüş 10 μg / ml konsantrasyonda bir Nil Kırmızısı çözeltisi hazırlayın. Bu solüsyonu karanlıkta 4 °C'de saklayın.
- Deiyonize suda %30 (h/h) etanol çözeltisi hazırlayın ve 4 °C'de saklayın.
- Tüm alg numunelerini aynı biyokütle konsantrasyonunda (5 g/L önerilir) ve ölçümde kullanılan standartlarla aynı şekilde hazırlayın. Bunu, önceden kurutulmuş numuneleri uygun miktarda fosfat tamponunda (0,6 g/L potasyum fosfat dibazik, 1,4 g/L potasyum fosfat monobazik) askıya alarak veya bulanıklığı ölçtükten sonra büyüyen bir alg kültürünün konsantrasyonunu fosfat tamponu ile 5 g/L'ye ayarlayarak yapın.
NOT: Canlı alg kültürleri üzerinde gerçekleştirilen ölçümler, bulanıklık kalibrasyon eğrisinin hassasiyetine bağlı olarak genellikle bunlarla ilişkili daha büyük hatalara sahip olacaktır. Kurutulmuş numunelerin yeniden askıya alınması, biyokütleyi tamamen dağıtmak için bir homojenizatör kullanılmasını gerektirebilir.
- Her numune için, 80 μl% 30 etanol çözeltisi, 10 μl Nil Kırmızısı çözeltisi ve 10 μl alg süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakanın tek bir oyuğunda karıştırın. Floresan ölçümünün değişkenliğini doğru bir şekilde hesaba katmak için, her numunenin 5 tekrarını gerçekleştirin.
- Cihaz ve hazırlıktaki günlük değişiklikleri hesaba katmak için standartlarla iki noktalı bir kalibrasyon eğrisi çalıştırın. Numunelerle aynı prosedürü kullanarak floresan ölçümü için standartları hazırlayın.
NOT: Genel olarak, cihazın yeniden kalibrasyonu için iki nokta yeterlidir, doğrusallığı doğrulamak için üç nokta çalıştırılabilir.
- Floresan ölçümlerini çok kuyulu bir plaka okuyucu spektrofotometresinde gerçekleştirin. Aşağıdaki koşulların en tutarlı sonuçları verdiği bulundu:
- 1.200 rpm'de, 3 mm yörüngede 30 saniye sallayın.
- 40 °C'de 10 dakika inkübe edin.
- 1.200 rpm'de, 3 mm yörüngede 30 saniye sallayın.
- Kayıt floresansı, 530 nm'de uyarma, 604 nm'de emisyon.
- Dahili standartlardan elde edilen sonuçları kullanarak floresan ölçümlerini yağ içeriğine dönüştürün.