Hücrelerin Periyodik Asit-Schiff Boyama: Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinde Glikojen Düzeylerini Tespit Etmek İçin İn Vitro Bir Teknik

Özet

Kaynak: Tabatabaei Shafiei, M., et al. Periyodik Asit Schiff Boyaması ile Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinde Glikojenin Saptanması. J. Vis. Uzm. (2014).

Bu video, periferik kan mononükleer hücrelerinin glikojen seviyelerini in vitro olarak değerlendirmek için periyodik asit-Schiff boyama tekniğini göstermektedir. Leke, hücre içi glikojen granüllerine macenta bir renk vererek onları mikroskop altında görünür hale getirir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Tam Kandan PBMC İzolasyonu

NOT: Bu prosedürü, steril teknik ve üretici tarafından sterilize edilmiş ekipman kullanan bir biyogüvenlik kabininde gerçekleştirin.

1. Heparinize (pıhtılaşmayı önleyici) kan alma tüplerinden 10-15 ml tam kanı dikkatlice 50 ml'lik steril konik bir tüpe dökün. Küçük kan dökülmeleri için, temizleme mendili kullanarak ddH₂O ve% 70 EtOH ile silin.
2. Konik tüpteki kanı Fosfat Tampon ....

Sonuçlar

Şekil 1: PBMC'de PAS boyamanın adım adım metodolojisi.(A) İlk olarak, PBMC'nin izolasyonu ficoll gradyanı ile sağlanır, sol panel santrifüjleme öncesi hazırlığı gösterir, sağ panel santrifüjlemeden sonra gösterir, burada PBMC'yi içeren buffy coat tüpün merkezinde gözlenir. (B) İzole edilmiş PBMC'ler, formalin-etanol fiksatif çözeltisi kullanılarak slayt üzerine sabitlenir. Sürgü, plastik bir yıkama ş.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Periyodik Asit Shiff Kiti	Sigma-Aldrich	395B	Kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin. Bu kitteki malzemeler toksik ve zararlıdır. Dikkatli olun.
α-Domuz pankreasından elde edilen amilaz	Sigma-Aldrich	A3176
Binoküler Mikroskop	Carl Zeiss Mikroskobu	Axio Laboratuvarı A0
Glikojen Test Kiti	Sigma-Aldrich	MAK016
Ficoll-Paque ARTI	VWR, GE Sağlık	17-1440-02	Sükrozun noniyonik sentetik polimeri.
merkezkaç			PBMC izolasyonu için döner kovalar kullanıldı.

Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi