$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu için Numune Hazırlama
- Boyama ve dehidrasyon için çözeltiler hazırlayın.
- Buz üzerindeki üç adet 50 mL'lik santrifüj tüpünün her birine 45 mL %80 etanol yerleştirin. Bunları #1, #2 ve #3 olarak etiketleyin. Etanolü RNase / DNaz içermeyen su ile seyreltin.
- 45 mL %95 etanolü buz üzerinde 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyun.
- 45 mL %100 etanolü 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne buz üzerine yerleştirin.
- Oda sıcaklığında 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne 45 mL ksilen koyun.
DİKKAT: Çeker ocakta ksilen kullanılmalıdır.
- Bir PEN membran slaytını eldivenli bir elinize yerleştirerek kısa bir süre çözün, ardından OCT.
çıkarmak için 50 mL santrifüj tüplerinde çalkalama ile 45 mL% 80 etanol (# 1 ve # 2) içinde 30 saniye boyunca iki kez yıkayın
NOT: Boyama sırasında gevşeyen OCT'nin bölümleri gizlemesini önlemek için boyamadan önce OCT'yi çıkarmak önemlidir. Forseps, ajitasyon ile yıkanmayan OCT'nin çıkarılmasını kolaylaştırmak için kullanılabilir.
- Bir alüminyum folyo tabakası üzerine slayt yerleştirin. Slaytın üzerine %50 etanol içinde 0,8 mL %0,1 kresil menekşe pipetleyin ve 30 saniye boyayın. Slaytı 30 saniye boyunca 45 mL %80 etanol (# 3) içinde yıkayın ve ardından 50 mL santrifüj tüplerinde 45 mL %95 etanol, %100 etanol ve ksilen ile her biri 30 saniye boyunca geçiş yoluyla dehidre edin.
- Ksilen ve kuru bölümleri boşaltmak için slaytları hassas bir görev sileceği üzerinde 5 dakika bekletin.