$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Beyin boyama ve dilimleme
- Orta serebral arter tıkanıklığı deneyinden sonra, beyin sapı da dahil olmak üzere beyni kafatasından çıkarın ve buz gibi PBS'de yıkayın.
- Hayvanların ağırlığına bağlı olarak beyin paslanmaz çelik matrisinin doğru boyutunu seçin (Malzeme Tablosuna bakınız) (Şekil 1B). Beyni, ventral tarafı yukarı bakacak şekilde beyin matrisine yerleştirin.
not: Matrise oturduğunda, beynin ventral yüzeyi kalıbın üst yüzeyine paralel olmalıdır.
- Bıçakları kullanarak beynin ön ve kuyruk kısımlarını (her iki taraftan 2 bıçak) kısıtlayın.
not: Dilimleme matrisine uyumlu tıraş bıçakları kullanılmalıdır. Genel olarak, sıçan beyni dilimleme için uyumlu, tek kenarlı bir tıraş bıçağı (0,01 inç'e (0,254 mm) kadar kalınlık) kullanılabilir.
- Bıçakları kısmen (beyni tamamen kesmeden) ilk ve son bıçaklar arasındaki kanallara yerleştirin. Tüm bıçaklar paralel olarak yerleştirildiğinde ve düzenlendiğinde, beyni 2 mm'lik koronal dilimler halinde kesmek için tüm bıçakları aynı anda avuç içi ile aşağı doğru bastırın.
- Bıçakları iki parmağınızla yanlardan sıkıca kavrayın ve dilimlenmiş beyinle birlikte matristen çıkarın.
- Beyin dilimlerini bir tepsiye (70 mL, 72 x 72 mm) birer birer yerleştirin. Dilimleri düzenlerken, her dilimin ön yüzeyinin daima yukarı baktığından emin olun.
- PBS'de ılık (+37 °C) %1 TTC solüsyonunu beyin dilimlerine dökün ve karanlıkta 37 °C'de 8 dakika inkübe edin.
not: Beyin dilimleri inkübasyon sırasında TTC çözeltisine tamamen daldırılmalıdır.
- % 1 TTC çözeltisinde inkübe edildikten sonra, görüntüleri yakalamak için beyin dilimlerini mavi plastik tepsiye aktarın. Beyin dilimlerini frontalden kaudal kısma doğru sırayla düzenleyin ve sagital düzlemdeki yarım küreleri ayırmak için bir neşter kullanın.
