Sülfatlanmış Glikozaminoglikanların Gümüş Boyanması: Poliakrilamid Jellerde Sülfatlanmış Glikozaminoglikanların Görselleştirilmesi İçin Bir Boyama Yöntemi

Özet

Kaynak: LaRiviere, W. B., et al. Poliakrilamid Jel Elektroforezi ve Gümüş Boyama ile Glikozaminoglikanların Tespiti. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, sülfatlanmış glikozaminoglikan oligosakkarit fragmanlarının kombine Alcian mavisi ve gümüş boyaması için bir prosedür gösteriyoruz. Bu kombine boyama tekniği, poliakrilamid jellerdeki farklı uzunluklardaki glikozaminoglikan polimerlerinin bantlarını önemli ölçüde çoğaltır.

Protokol

1. Gümüş boyama protokolü

1. Gümüş boyama için gerekli tüm solüsyonları önceden hazırlayın (Tablo 1).
   not: PAGE jeline lekelenene, geliştirilene ve durdurma solüsyonuna yerleştirilene kadar doğrudan dokunmayın. Bunun yerine, temiz plastik veya cam aletler kullanarak jeli manipüle edin. Jelin doğrudan ele alınması, boyamadan sonra jel üzerinde parmak izi bozulmalarına ve diğer görünür artefaktlara neden olacaktır.
2. Çalışma tamamlandığında, kaseti sökün ve deiyonize edilmiş, filtrelenmiş suyla dolu temiz, orta-büyük bir kapta jeli çıkarın.
   

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Alcian Mavisi 8GX (katı)	ThermoFisher Bilimsel	AC400460100
Amonyum hidroksit (sıvı)	ThermoFisher Bilimsel	A669S-500	Sertifikalı ACS
Barnstead GenPure Pro Su Arıtma Sistemi	ThermoFisher Bilimsel	10-451-217 PAKET	Herhangi bir su deiyonize / arıtma sistemi kabul edilebilir bir alternatiftir
Buzlu asetik asit (sıvı)	ThermoFisher Bilimsel	A35-500	Sertifikalı ACS
Metanol (sıvı)	ThermoFisher Bilimsel	A412-500	Sertifikalı ACS
Gümüş nitrat (katı)	ThermoFisher Bilimsel	S181-25 Serisi	Sertifikalı ACS
Sodyum hidroksit (katı)	ThermoFisher Bilimsel	S392-212 Serisi
Vakum filtre ünitesi, tek kullanımlık, 0.22uM gözenekli PES, 500mL hacim	ThermoFisher Bilimsel	569-0020	Alternatif hacimler ve filtre malzemeleri kabul edilebilir
Moleküler Görüntüleyici Jel Doc XR Sistemi	Biyo-Rad	170-8170	Karşılaştırılabilir herhangi bir jel görüntüleme sistemi kabul edilebilir bir alternatiftir

Serisi Serisi Serisi