Masson Goldner Trikrom Boyama: Kardiyovasküler Fibroz Tespiti için Kalp Bölümlerindeki Kollajeni Görselleştirme Tekniği

Özet

Kaynak: Valentin, J., et al. Sıçanlarda Kronik Miyokard İnfarktüsünün Histolojik Ölçümü. J. Vis. Uzm.(2016).

Bu video, kardiyak patolojilerle ilişkili fibrotik büyümeyi görselleştirmek için kalp dokusundaki kollajen liflerinin, çekirdeklerin ve sitoplazmanın diferansiyel boyanmasını göstermektedir.

Protokol

1. Masson-Goldner Trikrom Boyama

1. Manuel bir mikrotom (kalınlık: 5 μm) ile parafine gömülü kalp bloklarından doku kesitleri yapın.
2. Masson-Goldner trikrom boyama ile her sıçan için her kalp kısmından bir slayt boyayın (slayt başına 3 - 4 enine bölüm).
   1. Slaytları 60 °C'de bir fırında eritin. Bir davlumbaz altında, her biri 10 dakika boyunca iki kez ksilol içinde deparafinize edin. %100 etanol, %95 etanol, %70 etanol ve damıtılmış suda her biri 3 dakika rehidre edin.
   2. Onları bir gecede Bouin solüsyonunda sabitleyin. Ardından, akan musluk suyunda 10 - 15 dakika durulayın. Damıtılmış suda durulayın. Onları Mayer'in hematoksilen içinde 3 dakika inkübe edin.
   3. Slaytları çıkarın ve 5 dakika damıtılmış suda bekletin. Daha sonra asit Fuchsin-Ponceau'da 5 dakika inkübe edin. % 1 asetik asit içinde 1 dakika durulayın.
   4. Daha sonra, 1 dakika boyunca fosfomolibdik asit Orange G içinde inkübe edin. % 1 asetik asit içinde 1 dakika durulayın, açık yeşil boyada 10 dakika inkübe edin ve% 1 asetik asit içinde 1 dakika durulayın.
   5. %70 etanol (30 saniye), %95 etanol (30 saniye) ve %100 etanol (5 dakika) içinde kurutun. Doku bölümlerine bir damla reçineli bir montaj ortamı koyun, üzerlerini lamellerle örtün ve kurumasını bekleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Mayer hematoksilen	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Asit Fuchsin CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Turuncu G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Açık yeşil CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Ksilol	10315083	Honeywell
Etanol mutlak	10303990	Honeywell
Stereolojik mikroskop	SM2800	Nikon
Formaldehit	99340	Reactolab (Reactolab)
Kaset gömme	K113.1	Carl Roth'un fotoğrafı
Bersoft Görüntü Ölçüm Yazılımı		Bersoft.com	Lisanslı yazılım

· Serisi Serisi .