Çift Boyama Yöntemi: Rutenyum Kırmızısı ve Laktofenol Pamuk Mavisi Kullanarak Bitki-Mantar Etkileşimlerini Görselleştirme Tekniği

Bu makalede

Özet

Kaynak: Marques, J. P. R. ve Nuevo, L. G. Bitki-Mantar Etkileşiminde Pektini Tespit Etmek için Çift Boyama Yöntemi. J. Vis. Uzm. (2022).

Bu video, bir kahve pası bitkisindeki bitki-mantar etkileşimleri sırasında pektinleri ve kitinleri görselleştirmek için rutenyum kırmızısı ve laktofenol pamuk mavisi kullanan bir çift boyama yöntemini göstermektedir. Prosedür, mantar enfeksiyonları sırasında bitki savunma mekanizmalarının anlaşılmasına yardımcı olur.

Protokol

1. Çift boyama işlemi

Kahve arabica cv. Catuaí'nin kahve pası ile enfekte olmuş ultra ince, reçineye gömülü yaprak bölümleriyle başlayın. Bölümleri laktofenol içinde 2 mL %5 pamuk mavisi (%40 gliserol, %20 fenol ve suda %20 laktik asit) ile kaplayın ve sıcak bir plakada 45 °C'de 5 dakika ısıtın (Şekil 1A).
Slaytı damıtılmış suyla doldurulmuş bir beherde üç kez yıkayarak fazla boyayı çıkarın (Şekil 1B-D).
2 mL %0.01 rutenyum kırmızısı ile suda 1 dakika boyayın (Şekil 1E).
Slaytı damıtılmış suyla doldurulmuş bir beherde üç kez yıkayarak fazla boyayı çıkarın (Şekil 1F,G).
Bölümlerin üzerine bir damla damıtılmış su koyun ve ışık mikroskobu analizi yapmak için bölümleri 24 mm x 60 mm'lik bir lamel ile örtün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1: Çift boyama protokolünün bireysel adımlarının ayrıntıları. (A) Bölümleri pamuk mavisi laktofenol damlaları ile örtün ve slaytları sıcak bir plaka üzerinde 45 °C'de ısıtın. (B-C) Damıtılmış suda yıkayarak fazla boyayı çıkarın. (D) Yıkandıktan sonra cam kızakları üzerindeki bölümler (oklarla gösterilir). (E) Bölümleri rutenyum kırmızısı damlalarıyla örtün. (