Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Doku Fibrozu Kantifikasyonu
- Paraformaldehitle sabitlenmiş kalp dokusunu bir doku kesit alma cihazına yerleştirin ve 2 mm kalınlığında bölümler kesin. Doku bölümlerini bir gömme kasetine yerleştirin. Dokuyu bir dizi kademeli alkol banyosu ile kurutun (her biri 1 saat boyunca %50, %75, %95 ve %100).
- Dokuyu 1 saat ksilen ile ve son olarak 1 saat balmumu ile sızın. Sızan dokuyu bir gömme kasetine yerleştirin ve parafin mumu ile gömün. Gömülü dokuları mikrotoming olana kadar oda sıcaklığında parafin bloklarında saklayın.
- Gömülü dokuyu 4 μm kalınlığında bölümler halinde dilimleyin. Bölümleri 45 ºC'lik bir su banyosuna yerleştirin. Bir cam slaytı belirli bir açıyla su banyosuna batırın ve slayta kısmi tutturmaya izin vermek için parafin bölümünün kenarlarına kademeli olarak yaklaşın.
- Doku bölümünün altındaki potansiyel hava ceplerini çıkarmak ve daha iyi bağlanmayı kolaylaştırmak için sürgüyü banyonun içine ve dışına hareket ettirin. Slaytları 37 ºC'de 1 saat kurutun ve histolojik boyama için oda sıcaklığında saklayın.
- Slaytı bir tanka koyun. Slaytı 30 dakika boyunca ksilen ile deparafinize edin ve sırayla seyreltilmiş alkolde (her biri 3 dakika boyunca %95, %75 ve %50) ve son olarak damıtılmış suda rehidre edin. Doku bölümlerini 1 saat boyunca tamamen kaplamak için yeterli picrosirius kırmızı solüsyonu kullanın. Slaytları iki değişiklik için% 0.5 asetik asit çözeltisinde durulayın ve ardından mutlak alkolde iki durulama yapın.
- Slaytı havayla kurutun ve slaytı bir lamel ile sentetik reçineye monte edin. Slaytı görünür bir ışık alanında fotoğraflayın.
not: Fotoğraftaki kırmızı alan, mikroskop altında 200X büyütmede bir picrosirius kırmızı pozitif bölgesini göstermektedir. Fibrozun derecesini gösteren picrosirius kırmızı pozitif bölgesinin toplam alan üzerindeki yüzdesini hesaplayın.
