Kongo kırmızısı boyama: bitki gövdesi bölümlerindeki selüloz birikintilerini görselleştirmek için bir teknik

Özet

Kaynak: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Arabidopsis thaliana İkincil Hücre Duvarı Elemanlarının Histokimyasal Boyanması. J. Vis. Uzm. (2014).

Bu videoda, Arabidopsis thaliana gövde bölümlerindeki selüloz birikintilerini görselleştirmek için Kongo kırmızısı boyama yöntemini gösteriyoruz.

Protokol

1. Kongo Kırmızı Boyama

1. % 0.5'lik bir kongo kırmızısı çözeltisi hazırlamak için 0.5 g kongo kırmızısını 100 ml damıtılmış suda çözün.
2. Gövde bölümlerini 2.0 ml'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Tüpe 1 ml% 0.5 Kongo kırmızısı çözeltisi ekleyin. %0,5'lik kongo kırmızısı solüsyonunu bölümleri bozmadan yukarı ve aşağı nazikçe pipetleyin.
   NOT: Bölümlere zarar verebileceğinden, bölümleri pipet ucuna pipetlememeye dikkat edin.
3. Oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin ve pipetlemeyi tekrarlayın. Ardından oda sıcaklığında 3 dakika daha inkübasyon yapın.
4. 700 μl% 0.5 Kongo kırmızısı çözeltisi çıkarmak için 1 ml'lik bir pipet kullanın. Kongo kırmızısı çözeltisini durulamak için 700 μl damıtılmış su ekleyin. Yıkama solüsyonu berraklaşana kadar yıkamayı 3-4 kez tekrarlayın.
5. 1 ml'lik bir pipet kullanın, ucu bölümler zarar görmeden kolayca pipetlenebilecek şekilde kesilmiştir. Bölümleri nazikçe uca ve bir mikroskop lamına pipetleyin ve üzerlerini lamel ile örtün. 560/40.
   bant geçişine sahip bir filtre kullanarak mavi ışık uyarımı altında mikroskop lamındaki numuneleri gözlemleyin NOT: Mikroskobik analizden önce bölümleri uzun süre suda saklamayın, çünkü su kongo kırmızısını 10-30 dakika içinde yıkayacaktır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kongo Kırmızısı	Sigma	C6277	Disodyum 3,3' - [[1,1'-bifenil]-4,4'-diylbis (azo)] bis (4-aminonaftalin 1-sülfonat) [CAS Numarası 573-58-0]
Mikrosantrifüj Tüpleri (0.6 ml)	Axygen Bilimsel	MCT-060-C
Mekanik deklanşörü olmayan CCD çipli kamera	Hamamatsu	C4742-95
Yüksek hızlı renkli kamera	Hayal Etme	MicroPublisher 5.0 RTV
Kamera yazılımı	Moleküler Cihazlar	MetaMorph sürüm 7.7.0.0
Analitiği hayal etmek	kerpiç	Photoshop CS4
Mikro Kapaklı Camlar, Kare, No. 1	VWR (VWR)	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8 inç) - Kapak camları korozyona dayanıklıdır ve eşit derecede kalın ve düzdür. 1 numaralı kalınlık 0,13 ila 0,17 mm'dir.
Buzlu Mikro Slaytlar, 1 mm	VWR (VWR)	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2 Filtre küpü	Leica Belediyesi	11513851/11513885	560/40 bant geçişli Kongo kırmızısı analizi için kullanılan filtre.