Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
2.5K görüntülenme
⸱
8 Temmuz 2025
Kaynak: Agamasu, C. et al. Tamamen İşlenmiş Rekombinant KRAS4b: Farnesile ve Metillenmiş Proteinin İzole Edilmesi ve Karakterize Edilmesi. J. Vis. Uzm. (2020)
Bu video, böcek hücresi protein lizatından rekombinant proteini izole etmek için katyon değişim kromatografisi tekniğini göstermektedir.
1. Protein saflaştırma
| Tampon çözelti | Tamponlama maddesi (tümü 20 mM) | Ph | NaCl (mM) | İmidazol (mM) | MgCl2 | TCEP (Türkçe) |
| Bir | HEPES ÜNİVERSİTESİ | 7.3 | 300 | - | 5 | 1 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Şekil 1: Saflaştırma işleminin SDS-PAGE jelleri. (A) Lizattan IMAC yakalama. FNTA/B, ~48 kDa'da göç eden karanlık bantlardır ve His6-MBP-tev-KRAS4b, ~67 kDa'da göç eden karanlık banttır. M = protein moleküler ağırlık merdiveni; T = toplam protein; L = arıtılmış lizat/kolon yükü; F = sütun akışı. Fraksiyonlar, artan bir imidazol konsantrasyon gradyanı ile ayrıştırılır. (B) 1-5 olarak eti.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,8 mL Güvenli Kilitli Tüpler, Doğal | Eppendorf Belediyesi | 22363204 | |
| 11 mm Cl SS Kilitli Geçmeli Otomatik Numune Alma Cihazı Şişeleri | Termo Bilimsel | 30211SS-1232 | |
| 5427R Santrifüj | Eppendor (Eppendor) | ||
| Asetonitril, HPLC Sınıfı | Fisher Kimya | A998-1 1L | |
| Katyon Değişim Kromatografisi (CEX) sütunu | GE Sağlık Yaşam Bilimleri | 29018183 | HiPrep SP Sefaroz Yüksek Performans |
| Exactive Plus EMR Kütle Spektrometresi | Termo Bilimsel | ||
| Gilson şişeleri 7x14 mm Tüpler | GE Sağlık | BR-1002-12 | |
| Yüksek hızlı/tezgah üstü santrifüj | Thermo Fischer Bilimsel | 05-112-114D | 4.000 xg'ye kadar kapasite |
| His6-Tütün Aşındırma Virüsü (TEV) proteazı | Ekle | 92414 | Raran-Kurussi ve ark. (2017) TEV Proteaz ile Afinite Etiketlerinin Çıkarılması. İçinde: Burgess Brown N. (eds) E.coli'de Heterolog Gen Ekspresyonu. Moleküler Biyolojide Yöntemler, vol 1586. Humana Basın, New York, NY |
| EDTA veya diğer şelatörler içermeyen Proteaz İnhibitörü Kokteyli | Kırlangıç Sigma | P8849 Serisi | |
| Amonyum Asetat | Sigma-Aldrich | 09689-250g | |
| Argon gazı | Hava gazı | ARUP (ARUP) | |
| Formik Asit | Sigma-Aldrich | F0507-500MI | Reaktif Derecesi veya daha iyisini kullanın |
| NGC Kromatografi Sistemi | BioRad (BiyoRad | 78880002 | NGC QuestTM 100 Kromatografi sistemi |
| Tutuculu lipid ekstruder seti | AVANTI POPOLAR LİPİDLER | 610023 | |
| Sıvı nitrojen | Hava gazı | NI-DEWAR | |
| Ultra-15 Santrifüj Filtre Üniteleri, 10K NMWL | Kırlangıç Sigma | UFC901008 | PES zarı |
| Ultracel 10K MWCO Ultra 0.5 mL Santrifüj Filtreleri | Amikonya | UFC501024 | |
| Ultrasantrifüj | Beckman Coulter'ın fotoğrafı. | Optima - L80K | 100.000 xg kapasiteli |
| Çelik | Sigma | C3023 |
