İnsan İskelet Kaslarında Glikojen Dağılımını Ölçmek için Transmisyon Elektron Mikroskobu

Özet

Kaynak: Jensen, R., et al. Transmisyon Elektron Mikroskobu Kullanılarak İskelet Kası Liflerinde Hücre Altı Glikojen Dağılımının Miktarının Belirlenmesi. (2022)

Bu videoda, hücre altı glikojen dağılımını görselleştirmek ve ölçmek için insan iskelet kası dokusunun numune hazırlığını ve transmisyon elektron mikroskobu için boyanmasını gösteriyoruz.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir

1. Birincil fiksasyon, fiksasyon sonrası, gömme, kesit alma ve kontrast oluşturma

1. 2 mL'lik bir mikro santrifüjleme tüpünde 1.6 mL birincil fiksatif çözelti (0.1 M sodyum kakodilat tamponunda (pH 7.3) % 2.5 glutaraldehit) hazırlayın. 5 °C'de en fazla 14 gün saklayın.
2. Kas biyopsisinden veya tüm kastan, herhangi bir yönde maksimum 1 mm çapa sahip olan ve uzunlamasına lif yönünde enine kesite göre biraz da....

Sonuçlar

Şekil 1: Görüntüleme ve fiber tipleme. (A) Her lif randomize sistematik bir sırayla görüntülenir. (B) Subsarkolimal uzaydan bir görüntü örneği. (C) Miyofibriler uzaydan bir görüntü örneği. (D) Her miyofibriller görüntüde, bir Z diskinin genişliği ölçülür (kırmızı çizgiler). Toplam 12 Z-diskin ölçümleri (görüntü başına bir tane) yaklaşık 0,03'lük bir .......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1,2-Propilen oksit	Merck	75-56-9
Gömme 812 reçine ortam kiti	Taab	T031
Gluteraldehit çözeltisi% 25	Merck	1.04239.0250
madde	Olympus		Görüntüleme yazılımı
Leica EM AC20	Leica Belediyesi		Otomatik kontrast sistemi
OSIS Veleta dijital fotoğraf makinesi	Olympus
Osmiyum tetroksit% 4 çözelti	Poli Bilimler	0972bir
Philips CM 100 Şanzıman EM	Philips
Potasyum hekzasiyanoferrat (II) trihidrat	Sigma-Aldrich	455989-245G
Sodyum kakodilat tamponu 0.2 M ph 7.4	Ampliqon.com	AMPQ40989.0500
Ultra mikrotom Leica UC7	Leica Belediyesi
Ultrostain kurşun sitrat% 3, stabilize çözelti	Leica Belediyesi	16707235
Uranil asetat dihidrat	Poli Bilimler	6159-44-0

Serisi İkinci El Gazetesi