Bir fare modelinde serebral kan akışını değerlendirmek için yaygın korelasyon spektroskopisi

Özet

Kaynak: Brothers, R. O., et al. Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu videoda, hafif travmatik beyin hasarı olan bir fare modelinde serebral kan akışını ölçmek için yaygın korelasyon spektroskopisi tekniğini gösteriyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir

.

>1. Yaygın korelasyon spektroskopisi ile serebral kan akışının değerlendirilmesi

1. DCS veri toplama
   1. Kafa derisindeki tüyleri alın. DCS saç yokluğunda en iyi sonucu verdiğinden, deneylere başlamadan önce kafadaki kürkün çıkarılması gerekir. Tipik olarak, epilasyon çalışmanın başlamasından 1-3 gün önce yapılır.
      1. Fareleri 45 saniye boyunca% 100 oksijende% 4.5 izofluran ile indükleyin ve% 100 oksijende% 1-2 izofluran ile koruyun.
      2. Kafayı gözler ve kulaklar arasında tıraş edin. Ardından, Şekil 1'deki gibi kafadaki tüyleri çıkarmak için tüy dökücü krem kullanın.
      3. Hayvanın bir ısıtma pedi üzerinde anesteziden kurtulmasına izin verin ve ardından kafese geri dönün.
   2. DCS ile serebral kan akışını ölçün. Ölçüm sırasında hareket artefaktlarını en aza indirmek için, kısa izofluran anestezisi altında fareleri inceleyin.
      not: Ölçümler boyunca solunumu ve ayak parmağı sıkışma tepkisini görsel olarak izleyin ve tutarlı anestezi derinliği sağlamak için izofluran konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın. Anestezi derinliğindeki önemli değişiklikler, izofluranın bilinen vazomodülatör etkileri göz önüne alındığında kan akışını değiştirebilir.
      1. 45 saniye boyunca% 100 oksijende% 4.5 izofluran ile indükleyin ve% 100 oksijende% 1.0-1.75 izofluran ile koruyun. Ayak parmağınızı kıstırma tepkisi ve normal solunum (dakikada ~ 60-80 nefes arasında) olmadan yeterli anestezi derinliğini onaylayın.
      2. 2 dakikalık bir stabilizasyon periyodundan sonra, DCS sensörünü, optik sensörün üst kenarı gözün arkası ile aynı hizada ve sensörün yan tarafı orta hat boyunca aynı hizada olacak şekilde sağ yarım küre üzerine nazikçe yerleştirin (Şekil 1). Oda ışığından korumak için elinizi sensörün üzerine koyun. 5 saniyelik veri alın (1 Hz alım).
      3. Sensörü sol yarım küre üzerine yeniden konumlandırın ve 5 saniyelik veri elde edin.
      4. Doku yüzeyinin altındaki lokal heterojenlikleri hesaba katmak için 3 kez / yarımküre tekrarlayın.
   3. Kurtarma
      1. Fareyi anesteziden çıkarın ve bir ısıtma pedine yerleştirin.
      2. Fare doğrultma refleksini geri kazandıktan sonra kafese geri koyun.

Sonuçlar

Şekil 1: Diffüz Korelasyon Spektroskopisi ile serebral kan akışının ölçümü. (A) Anestezi uygulanmış bir farede kan akışını ölçmek için bir optik sensör sağ hemisfer üzerinde nazikçe manuel olarak tutulur. (B) Sağ yarım kürede temsili sensör yerleşimi. Sensörün ana hatları kesikli siyah bir dikdörtgen olarak temsil edilir ve kaynak ve dedektör liflerinin konumu sırasıyla kırmızı ve mav...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Tüy dökücü krem	Amazon	Nair (Türkçe)
DiH2O	VWR (VWR)	VWRL0200-1000
Donanım Otokorelatör Kartı	www.correlator.com	Flex05-8ch
İzofluran 250 mL	MED-VET ULUSLARARASI	RXISO-250
Kimwipe (11,2 x 21,3 cm)	VWR (VWR)	21905-026
Laboratuvar girdap karıştırıcı	VWR (VWR)	10153-838
Laboratuvar Görünümü	Ulusal Enstrümanlar	Laboratuvar GÖRÜNÜMÜ
xPONENT yazılımı ile Luminex 200, HTS, FLEXMAP 3D veya MAGPIX	Luminex Şirketi
R Programlama Dili
RStudio	www.rstudio.com
Ses Seviyesi
1 m akrilik kılavuz tüp	McMaster-Carr	49035K85
4 foton sayma çığ fotodiyot	Perkin-Elmer	SPCM-AQ4C-IO
400 um çok modlu kaynak fiber	Thorlabs A.Ş.	FT-400-EMT
54 g cıvata	Ace Donanım		0,95 cm temel gövde çapı, 2 cm kafa çapı, 10,2 cm uzunluk
780 nm tek modlu dedektör fiber	Thorlabs A.Ş.	780 beygir gücü
852 nm uzun koherens uzunluklu lazer	TOPTICA Fotonik	iBeam akıllı