Method Article

Gelişim Araştırmaları Pencereleme Tavuk Yumurta

DOI:

10.3791/306

October 1st, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Civciv bıldırcın kuruntulardan ve odak boya etiketleme dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar kullanarak hücre kaderi harita deneyler için embriyo erişilebilirlik kolaylığı sağladı. Bu yazıda, uzun sağkalım süreleri için optimize edilmiş bir yumurta hazırlama yöntemi göstermektedir.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gelişme çalışma büyük ölçüde deneysel bir model olarak civciv embriyo kullanımı yardımıyla olmuştur. Civciv bıldırcın kuruntulardan ve odak boya etiketleme dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar kullanarak hücre kaderi harita deneyler için embriyo erişilebilirlik kolaylığı sağladı. Buna ek olarak, ovo elektroporasyon kullanarak plazmid DNA, protein kaplı boncuklar ve giriş yerleştirilmesi de dahil olmak üzere çeşitli moleküler tedirginlikler sağlar. Bu deneyler, merkezi ve periferik sinir sistemi gelişimi hakkında önemli veriler vermiştir. Bu çalışmaların çoğu için, kabuğu açık ve embriyonun büyüme rahatsızlık vermesini olmadan Sık kalkış için gereklidir. Embriyo, yumurta kabuğu yeniden açarak izleyen gelişim evreleri incelenebilir. Bu makalede, tavuk yumurtası açmak için birkaç mükemmel bir yöntem olmakla birlikte uzun sağkalım süreleri için optimize edilmiş bir yöntem göstermektedir. Bu yöntemde, yumurta yan dayanmaktadır ve küçük bir pencere kabuk kesilir. Deneysel işlemin ardından, kabuk, yumurta gelişimi süresince kapsayacak şekilde kullanılır. Kabuğu örten şeffaf plastik bant embriyo korur ve kuluçka dönemi kalan sırasında hidrasyon korumak yardımcı olur. Bu yöntem, iki gün inkübasyon başında kullanılır olmuştur ve olgun embriyonik çağlar boyunca hayatta kalma izin verdi.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Inkübatör gelen yumurta çıkarın

  1. 37 o C'da C bağıl nem% 60 üstünde.
  2. Yumurta çıkarın; yumurta 90 ° döndürün, böylece büyük temel yatay yatıyor.

2. Sterilize etmek için Swab yumurta

  1. % 70 etanol ile non-steril gazlı bez bir yığın Doymuş.
  2. 2-3 adet 5 yumurta kadar çubukla kullanın. Gazlı bez kirli atın.

3. Albümin kaldırılması sitesi hazırlanması

  1. Albümin çekilecek alanını korumak için temel sol 3M plastik bant 1 "x 1" parça kesin ve yerleştirin.

4. Albümin, kaldırılması

  1. Bandın ortasında küçük bir delik y....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yöntem deneysel manipülasyonlar uzun sağkalım süreleri sağlar. Örneğin, boya-etiketleme çalışmaları, E10 ya da daha sonra bir kader haritalama çalışması (1) hayatta kalma izin verdi. Buna ek olarak, gen ekspresyon seviyelerinin değiştirilmesi ve daha sonra gelişimsel aşamaları (2-6) devam etmek için gerekli geliştirme ovo elektroporasyon çalışmalarda kullanılmaktadır. Bu pencere tekniği embriyo manipülasyonları sonra hayatta kalma gerektiren herhangi bir işlem ile birlikte kullanılabilir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Döner inkübatör Profi37 ° C'de Bakım; Bağıl nem oranı %60'ın üzerinde ayarlanmış
dereceler% 70 EtOH
gazlı bez
3M plastik bant
10cc şırınga 1 / yumurta
18G iğneler 1 &# 189; inç iğne, 1 / şırınga
Diseksiyon makası 4" keskin düz bıçaklar
Döllenmiş Yumurtalar

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
  2. Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
  3. Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
  4. Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
  5. Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
  6. Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Chicken Egg WindowingEgg PreparationEmbryo ManipulationAlbumin ExtractionShell SealingTape ApplicationDevelopmental StudiesIn Ovo ProceduresEgg HandlingEmbryo Survival

Related Articles