Güçlü TCR Sinyallerine Timosit Yanıtını Modüle Eden Kinaz İnhibitörlerinin Belirlenmesi

Özet

Kaynak: Chen, E. W., et al. Kimyasal İnhibitör Kütüphanelerinin Taraması Yoluyla T Hücresi Reseptör Sinyalizasyonunun Mediatörlerinin Tanımlanması. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, kendiliğinden reaktif CD4^+CD8+ çift pozitif immatür timositlerin apoptozunu modüle eden küçük moleküllü kinaz inhibitörlerini tanımlamak için bir yöntem açıklıyoruz. Apoptoz, çift pozitif timositlerde, anti-CD3- ve anti-CD28 kaplı manyetik boncuklarla aktive edilerek indüklenir; Bunu, inhibitörlerin apoptotik belirteç ekspresyonunu modüle edip etmediğini tespit etmek için küçük moleküllü bir inhibitör tedavisi ve akış sitometrisi analizi takip eder.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Kinaz İnhibitörü Kütüphane Taraması (Santrifüjden Bağımsız Test)

1. Timositlerin kinaz inhibitörleri ile tedavisi
   1. Bir timosit süspansiyonu hazırlayın.
   2. 25 x 10⁶ hücre / mL'lik bir timosit süspansiyonu elde etmek için timositleri tam RPMI'de seyreltin.
   3. Çok kanallı bir pipet kullanarak küçük hacimli bir plakanın her bir oyuğuna 40 μL timosit ekleyin. Plakayı buzun üzerine yerleştirin.
   4. İnhibitörleri, stok plakasından, DMSO'dan ve deksametazondan gelen inhibitörleri, dört kısım tam RPMI'ye bir kısım inhibitör / DMSO / deksametazon (5 seyreltme faktörü) oranında tam RPMI'de seyreltin.
      not: Bu küçük hacimli plakada kullanılan hacimler geleneksel yönteme göre 5 kat daha küçük olduğundan, inhibitörler ve kontrol reaktifleri, plakadaki timositlere eklenmeden önce beş kat seyreltilir.
   5. Adım 1.1.4'te hazırlanan inhibitör plakasının karşılık gelen kuyucuklarından 96 oyuklu plakaya 0.5 μL kinaz inhibitörü ekleyin.
   6. Sekiz kuyu işlenmemiş kontrol hazırlayın. Adım 1.1.4'te hazırlanan DMSO'nun 0,5 μL'sini ekleyerek dört kuyulu araç ile tedavi edilen kontrol hazırlayın. Adım 1.1.4'te hazırlanan seyreltilmiş deksametazonu kullanarak 5 μM deksametazon ile muamele edilmiş kontrollerden oluşan dört kuyu hazırlayın (Şekil 1).

2. Anti-CD3/CD28 boncukları kullanılarak timositlerin uyarılması

1. Boncukların eşit şekilde yeniden askıya alındığından emin olun. 1 mL boncuk alın ve 2 mL PBS ile yıkayın. Manyetik bir stand kullanarak boncukları ayırın ve çözeltiyi aspire edin. Boncukları 1 mL tam RPMI.
   içinde yeniden süspanse edin not: Boncukların hücrelere oranı 1'e 2,5'tir. Uyarılacak kuyucuk sayısına ve kullanılan timosit sayısına bağlı olarak boncuk miktarını ayarlayın.
2. İnhibitör ile muamele edilen her numuneye, DMSO ile muamele edilen dört numuneye ve muamele edilmemiş sekiz numuneden dördüne 10 μL boncuk süspansiyonu ekleyin. Kalan dört işlenmemiş kuyucuğa 10 μL tam RPMI ekleyin. Şekil 1, genel plaka düzenini göstermektedir.
   not: Kuyuların nihai hacmi, kuyuların maksimum kapasitesi dahilinde olan 50 μL'dir. Çapraz kuyu dökülmesini önlemek için dikkatli olmak ve plakaları dik tutmak önemlidir.
3. Karıştırmak için, bir mikroplaka orbital çalkalayıcı kullanarak plakayı çalkalayın. Alternatif olarak, çok kanallı bir pipet kullanarak kuyucukların içeriğini karıştırın.
4. Timositleri 37 °C,% 5 CO₂ inkübatörde 17 - 20 saat (veya gece boyunca) buharlaşma önleyici bir kapakla inkübe edin.

3. Plaka yıkayıcının kurulumu

>NOT: Plaka yıkayıcıyı kurma talimatları üretici tarafından sağlanır. Adımlar aşağıda kısaca belirtilmiştir. Her hazırlama adımı için yaklaşık 150 mL çözelti gereklidir.

1. Yıkama sistemini %1 Tween 20 içeren %70 etanol ile astarlayın.
2. Yıkama sistemini %1 Tween 20 içeren deiyonize su ile astarlayın.
3. Yıkama sistemini FACS yıkama tamponu ile astarlayın.

4. Yüzey antijenlerinin boyanması

1. Anti-TCRβ, anti-CD4, anti-CD8 ve anti-CD69 antikorları içeren bir antikor boyama karışımı hazırlayın. Antikorları FACS yıkama tamponunda 1:100 (h/v) oranında seyreltin.
2. Otomatik laminer akışlı yıkama sistemini kullanarak, yıkama başına 55 μL FACS yıkama tamponu kullanarak plakayı 9x yıkayın.
   not: Yıkamaların sonunda, her bir kuyucukta 25 μL artık hacim olacaktır.
3. Hücreleri, adım 1.4.1'de hazırlanan boyama antikor karışımının 25 μL'sinde yeniden süspanse edin.
4. Numuneler 96 oyuklu bir plakadan aktarılırsa, hücreleri 50 μL antikor karışımında yeniden süspanse edin ve numuneleri küçük hacimli plakaya aktarın. Bu adım, Şekil 2A'da gösterildiği gibi 2 numaralı yönteme karşılık gelir.
5. Karıştırmak için, plakayı bir mikroplaka orbital çalkalayıcı ile çalkalayın veya numuneleri çok kanallı bir pipet kullanarak karıştırın ve 30 dakika buz üzerinde inkübe edin.

5. Hücrelerin sabitlenmesi

1. Otomatik laminer akışlı yıkama sistemini kullanarak, yıkama başına 55 μL FACS yıkama tamponu kullanarak plakayı 9x yıkayın.
2. Kuyucuk başına 50 μL'de fiksasyon / geçirgenleştirme tamponu ekleyin (aktif kaspaz-3 apoptoz kiti ile birlikte gelir; adım 1.6.1'de belirtilen 10x perma / yıkama tamponu ve adım 1.6.2'deki anti-kaspaz-3 antikoru ile aynı).
3. 30 dakika buz üzerinde inkübe edin.

>6. Aktif kaspaz 3 için hücre içi boyama

1. 25 mL 10x perma/yıkama tamponunu 225 mL ultra saf su ile seyrelterek 1x perma/yıkama tamponu hazırlayın.
2. 2 mL 1x perma/yıkama tamponuna 1 mL anti-kaspaz-3 antikoru ekleyerek hücre içi aktif kaspaz boyası hazırlayın. Antikorun perma/yıkama tamponuna oranı 1:2'dir.
3. Yıkama sistemini 1x perma/yıkama tamponu ile astarlayın.
4. Plakayı 9x 1x perma/yıkama tamponu ile her yıkamada 55 μL'de yıkayın.
5. Adım 1.6.2'de hazırlanan hücre içi kaspaz boyasından 25 μL'yi tüm kuyucuklara ekleyin.
6. Karıştırmak için, plakayı bir mikroplaka orbital çalkalayıcı ile çalkalayın veya numuneleri çok kanallı bir pipet kullanarak karıştırın ve 1 saat buz üzerinde inkübe edin.
7. Plakayı 9x 1x perma/yıkama tamponu ile her yıkamada 55 μL'de yıkayın.
8. Tüm kuyucuklara 25 μL FACS yıkama tamponu ekleyin.
9. Pipetleme yoluyla yeterli karıştırma işleminden sonra numuneleri mikrotitre tüplerine aktarın.
10. Boş kuyucuklara 50 μL daha FACS yıkama tamponu ekleyin ve adım 1.6.9'u tekrarlayın.
11. 1.6.9 ve 1.6.10 adımlarını, numunelerin 200 μL'si mikrotitre tüplerinde toplanana kadar 2 kez tekrarlayın.
    not: Adım 1.6.10 ve 1.6.11'de açıklanan prosedürlerin amacı, hücrelerin küçük hacimli plakadan maksimum geri kazanımını sağlamaktır. Hücre sayıları önemli değilse, 1.6.10 adımından sonra, mikrotitre tüplerini FACS yıkama tamponu ile 200 μL'ye kadar doldurun.
12. Numunelerin akış sitometrik analizini yapın ve sonuçları bir FACS analiz programı ile analiz edin. CD4+CD8+DP timosit içeren kapıda kaspaz-3 aktivasyonu ve CD69 ekspresyonu analiz edildi.

Sonuçlar

Şekil 1: Timosit aktivasyon testinin plaka yerleşimi. (Yukarıya) Sütun 1 ve 12 kontroller için ayrılırken, sütun 2 ila 11 inhibitörle muamele edilen numunelerdir (bej). Negatif kontrol (uyarılmamış [NS]; gri) A1 ila D1 kuyularını işgal eder ve hücre ölümü için pozitif kontrol (deksametazon ile tedavi edilen [DEX]; mor) E1 ila H1 kuyularını kaplar. 2 ila 12 numaralı sütunlar, anti-CD3 / CD28 boncukları ile uyarılmış timositleri içerir...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DEV/SINIR	HyClone (Klon	SH30027FS
FBS (FBS)	HyClone (Klon	SH3007103
L-Glutamin	HyClone (Klon	SH3003401
Sodyum piruvat	HyClone (Klon	SH3023901
10 kat PBS	Vivantis Belediyesi	PB0344 – 1L
Kinaz Tarama Kütüphanesi (96-Kuyulu)	Cayman Kimya	10505	Kütüphanenin tam içeriği değişebilir
DMSO (Türkçe)	Sigma Aldrich	D2650
Deksametazon	Sigma Aldrich	D4902
anti-CD3 / CD28 boncukları	Thermo Fisher Bilimsel	11452D
FITC Aktif Kaspaz-3 Apoptoz Kiti	BD Pharmingen	550480	Fiksasyon/Geçirgenlik tamponu, 10X Perma/Yıkama tamponu ve anti-kaspaz 3 antikoru içerir
DA-Hücreli Yıkayıcı	MERAK	HT1000
96 kuyulu DA-Hücre Plakası	MERAK	96-DC-CL-05
Antikor
CD3e (İngilizce)	Biyo Efsane	100236
TCRb	BD Biyolojik Bilimler	553174
CD4 (İngilizce	BD Biyolojik Bilimler	740007
CD8	BD Biyolojik Bilimler	563786
CD69	eBiyobilim	25-0699-42
Inhibitör -leri
TG003	Cayman Kimya		Kinaz Tarama Kütüphanesinden
TG003	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PKC 412	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Doramapimod (Doramapimod)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Paklitaksel	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Erlotinib (Erlotinib Çiçeği)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Nekrostatin-5	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
NVP-BEZ235	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Ftalazinon pirazol	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-879	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
1-NA-PP1	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Torin 1	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid II	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
BIBF 1120	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SMI-4a (İngilizce)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid XI (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10657	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-703026	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Şeletrin klorür	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Tunikamisin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
GSK 1059615	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Ruksolitinib	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Nekrostatin-1	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 505124	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
MÜREKKEP128	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Kanertinib (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 431542	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PD 173074	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Valproik Asit (sodyum tuzu)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PD 0325901	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 203580	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
VX-702	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Emodin Dili	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CHIR99021	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Biyo	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Imatinib (mesilat)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Sunitinib Malat	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Gefitinib	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PP2	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
3-Metiladenin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid I	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid IV	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid V	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
MGK 663284	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
D 4476	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
NU 7026	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
H-9 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
İndirubin-3'-monoksit	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
KN-62	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
KN-93	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CGP 57380	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
İzo-Olomoucine	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
(S)-Glycyl-H-1152 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Bisindolilmaleimid VIII (asetat)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
ST638	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SU 6656	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
LY364947	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 203580 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10621	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
YM-201636	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
ZM 447439	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-041164	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
NVP-AEW541 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PP242	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
ABT-869	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10622	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
17β-hidroksi Wortmannin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10626	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SU 6668 Serisi	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10572	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
N,N-Dimetilsfingosin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
LY294002	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
U-0126	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Staurosporin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
KN-92 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-605240 (potasyum tuzu)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
O-1918	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Y-27632 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Leelamin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PD 98059	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PD 169316	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
TGX-221	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
(S)-H-1152 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-605240	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
D-eritro-sfingosin C-18	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
OSU03012	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
JNJ-10198409	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Leelamin (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Araşidonik Asit Leelamid	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Laurik Asit Leelamid	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-252424	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10505	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PI-103	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PIK-75 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Sfingozin Kinaz İnhibitörü 2	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Piceatannol (Pikeatannol)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SC-1	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
( R ) -Roskovitin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
BAY-43-9006	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10561	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AS-604850	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PI3-Kinaz α İnhibitörü 2	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
ML-9 (İngilizce	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Trisiribin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Erbstatin Analog	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Kenpaullone Belediyesi	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Olomoucine (Olomoucine)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-494	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-825	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-1478	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 216763	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 415286	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-17	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
H-8 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
LFM-A13	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SC-514	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Apigenin Belediyesi	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-18	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10554	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
DRB (Demokratik Sinir	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
RG-13022	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
RG-14620	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-490	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-82	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-99	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-213	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-183	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Lavendustin C	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
ZM 336372	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
5-İyodotubercidin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SB 202190	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10571	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Nilotinib	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
SP 600125	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
L-treo-Sfingosin C-18	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
H-89	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
HA-1077 (hidroklorür)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-370	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Wortmannin	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
AG-1296	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
KT 5823	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Janex 1	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10574	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10575	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10576	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
NH125	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
TWS119	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
MGK 210902	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10577	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CAY10578	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
PD 184161	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
CCT018159	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden
Myricetin (Miricetin)	Cayman Kimya	-	Kinaz Tarama Kütüphanesinden

) ) ) ) · Serisi · Serisi Serisi ) Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi ) Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi T Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi