Antijen Kaplı Boncuklarla Aktivasyon Sonrası B Lenfositlerinde Organel Dinamiği

Özet

Kaynak: Ibañez-Vega, J., et al., İmmün Sinaps Oluşumu Sırasında B Hücrelerinde Organel Dinamiğinin İncelenmesi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, antijen kaplı mikro boncuklarla aktivasyonlarını takiben B lenfositlerindeki organel dinamiklerini incelemek için bir yöntem açıklıyoruz.

Protokol

NOT: Aşağıdaki adımlar IIA1.6 B hücreleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

1. Antijen kaplı boncuklarla B hücresi aktivasyonu

1. Antijen kaplı boncukların hazırlanması
   1. B hücrelerini aktive etmek için, aktive edici (BCR-ligand+) veya aktive olmayan (BCR-ligand-) antijenlerle 50 μL (~ 20 x 10⁶ boncuk) 3 μm NH 2-boncuk kullanılarak hazırlanan antijenle kovalent olarak kaplanmış NH_2-boncuklar (Ag kaplı boncuklar) kullanın.
   2. IIA1.6 B hücreleri için BCR-ligand+ olarak anti-IgG-F(ab')₂ fragmanı ve BCR-ligand- olarak anti-....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
IIA1.6 (A20 varyantı) fare B-lenfoma hücreleri	ATCC (Uzay Servisi)	TİB-208	Yüzeyinde FcγIIR olmadan IgG içeren bir BCR eksprese eden Balb/c kökenli Murin B hücreli lenfoma
%100 metanol	Balıkçı Bilimsel	A412-4
10 mm çaplı kapak camları kalınlığı No. 1 dairesel	Marienfield-Üstün	111500
Amino-Dinamik Boncuklar	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	14307D
Anti-perisentrin	Abcam Belediyesi	AB4448	1:200 seyreltme önerilir ancak optimize edilmelidir
Anti-rab6	Abcam Belediyesi	ab95954	1:200 seyreltme önerilir ancak optimize edilmelidir
Anti-sec61	Abcam Belediyesi	AB15575	1:200 seyreltme önerilir ancak optimize edilmelidir
Bsa	göz kırpan	BM-0150
Çok Boncuklu Amino Mikro Küreler 3.00μm	Polibilim	17145-5
Poli-L-Lizin	Sigma	P8920 Serisi	Steril su ile seyreltin
dev/dak-1640 dev/dak	Biyolojik Endüstriler	01-104-1A
Triton X-100	Merck	9036-19-5
Tüp 50 ml	Corning	353043

Serisi Serisi (İngilizce) Serisi Serisi Serisi