Yetişkin Sineklerde Konak-Virüs Etkileşimlerini İncelemek için İntratorasik Viral Nano Enjeksiyon

Özet

Kaynak: Yang, S., et al. Drosophila melanogaster'de Viral Enfeksiyonun Kurulması ve Konak-Virüs Etkileşiminin Analizi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, yetişkin erkek Drosophila sineklerine pozitif anlamlı, tek sarmallı bir RNA virüsünün nano enjeksiyonunu gerçekleştirmek ve ardından enfeksiyon nedeniyle başlatılan antiviral yanıtları incelemek için bir prosedürü açıklıyoruz. Polimeraz zincir reaksiyonu analizi, enfekte sineklerde RNA interferansı ve JAK/STAT sinyali dahil olmak üzere bağışıklık yanıt yollarının aktivasyonunu gösteren spesifik genlerin yukarı regülasyonunu tanımlar.

Protokol

>1. Drosophila'da Viral Enfeksiyon

1. Nano enjeksiyon ile sinekleri enfekte edin ve hayatta kalma testleri yapın.
   1. Enjeksiyon iğnelerini hazırlamak için kılcal damarları çekin, enjeksiyon iğnesini yağla geri doldurun ve enjektörü monte edin.
   2. Anestezi, hafif bir CO₂ akışı altında ped üzerinde uçar. Sinekleri 50.6 nL virüs çözeltisinin (100 PFU, Tris-HCl tamponu ile seyreltilmiş, pH 7.2) göğüs içi enjeksiyonu ile aşılayın. En az 3 şişe sinek enjekte edin (şişe başına 20 sinek).
      not: Enjeksiyon zaman alıcıdır (genellikle saatte 100 sinek) ve Drosophila C ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
mikroskop	Olympus	CKX41
Nanoject II Otomatik Nanolitre Enjektör	Drummond Bilimsel	3-000-204	Nanoject II Değişken Hacimli (2,3 ila 69 nL) Cam Kılcal Otomatik Enjektör (110V)
Schneider'in Böcek Ortamı	Sigma	S9895 Serisi	Hücre kültürü
10 cm hücre kültürü kabı	Sigma	CLS430167	Hücre kültürü
Drosophila Kuluçka Makinesi	Percival	I-41NL	Drosophila'nın yetiştirilmesi
0.22um filtre	Kırlangıç	SLGP033RS
1.5 ml Mikrosantrifüj tüpleri	dağlamak	352070
1.5 ml RNaz içermeyen Mikrosantrifüj tüpleri	Aksiyen	MCT-150-C
ABI 7500 qPCR sistemi	ABI Dili	7500	qPCR (Kısmi Çözünürlük)
merkezkaç	Eppendorf Belediyesi	5810R
merkezkaç	Eppendorf Belediyesi	5424R
kloroform	Sigma	151858	RNA ekstraksiyonu
DEPC suyu	Sigma	95284-100 ML	RNA ekstraksiyonu
İzopropil alkol	Sigma	I9516 Serisi	RNA ekstraksiyonu
Lizis tamponu (RNA ekstraksiyonu)	Termo Balıkçı	15596026	TRIzol Reaktifi
Lizis tamponu (sıvı numune RNA ekstraksiyonu)	Termo Balıkçı	10296028	TRIzol LS Reaktifi
Optik Yapışkan Film	ABI Dili	4360954	qPCR (Kısmi Çözünürlük)
Penisilin-Streptomisin, Sıvı	Canlandırıcı	15140-122	Hücre kültürü
qPCR plakası	ABI Dili	A32811	qPCR (Kısmi Çözünürlük)
İstatistiksel yazılım	GraphPad Prizma 7
TransScript Fly Birinci İplikli cDNA Sentezi SuperMix	TransScript (Kod Çevirisi)	AT301 Serisi	RNA ekstraksiyonu
girdap	İKA	GIRDAP 3	RNA ekstraksiyonu
FBS (FBS)	Canlandırıcı	12657-029	Hücre kültürü
Düz tabanlı 96 kuyulu plaka	Sigma	CLS3922	Hücre kültürü
Hücre İnkübatörü	Fransa	MIR-553 Serisi
100 Yedek tüpler	Drummond Bilimsel	3-000-203-G/X

Serisi Belediyesi adet Serisi Serisi