Nötrofiller ve Biyofilm Arasındaki Etkileşimi İncelemek İçin Bir İn Vitro Test

Özet

Kaynak: Rana, P. S. J. B., et al. İnsan Nötrofilleri ve Staphylococcus aureus Biyofilmleri Arasındaki Etkileşimleri Görselleştirmek ve Ölçmek için Standartlaştırılmış In vitro Testler. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, nötrofil-biyofilm etkileşimini incelemek için bir in vitro testi göstermektedir. Biyofilm ve izole nötrofillere gömülü patojenik bakteriler, floresan etiketler kullanılarak etiketlendi ve nötrofillerin immün yanıtı ve bakterilerin immün yanıtından kaçışı bir floresan mikroskobu kullanılarak değerlendirildi.

Protokol

1. İn vitro biyofilm hazırlanması

1. İzole edilmiş koloniler elde edin S. aureus Tryptic Soya Agar gibi besin açısından zengin bir agar plakası üzerinde bir çizgi plakası tekniği kullanarak dondurularak korunmuş bir stoktan (bkz. Malzeme Tablosu).
2. 96 oyuklu bir plakanın tek tek kuyucuklarını steril H₂O içinde seyreltilmiş 100 μL% 0.001 (h / h) poli-Lizin (PLL) ile kaplayın ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Aseptik olarak, PLL çözeltisini vakum destekli bir aspirasyon tuzağı kullanarak aspire edin. Kuyuların gece boyunca oda sıcaklığında kurumasına izin verin.
   not:....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
% 0.9 sodyum klorür sulama, USP	Baxter	2F7124	Endotoksin içermez; Nötrofillerin izolasyonu için kullanılır
150 mL hızlı akışlı filtre ünitesi	Termo Bilimsel	565-0020
200 geçirmez etanol	VWR (VWR)	89125-188
3 mL şırınga	Bd	309657	Kan alımı için kullanılır
50 mL konik santrifüj tüpleri	Termo Bilimsel	339652
60 mL şırınga	Bd	309653	Kan alımı için kullanılır
Ağar	Fisher Biyoreaktifleri	BP1423-2
Alkollü çubuk	Bd		Kan alımı için kullanılır
Yara bandı			Kan alımı için kullanılır
BD Bacto Triptik Soya Suyu	Bd	DF0370-07-5	Triptik Soya Agar yapmak için %1,5 agar ile birleştirin
Hücre sayacı	Bal Saupply	202C
CellTracker mavi CMCH	Canlandırıcı	C2111	Mavi CMAC Boya (BCD)
Şeffaf alt 96 oyuklu düz tabanlı polistiren plakalar	Yardımcı yıldız	3370
Pamuklu gazlı bez	Balıkçı markası	13-761-52	Kan alımı için kullanılır
Kültür tüpleri	Balıkçı markası	14-961-27	Borosilikat Cam 13 x 100 mm
D- (+) - glikoz	Sigma	G-8270 Serisi
Leuconostoc spp.'den Dekstran.	Sigma	31392-250G	Nötrofillerin izolasyonu için kullanılır
Dulbecco'nun fosfat tamponlu tuzlu su (DPBS) 1x	Gibco (Gibco)	14190-144
Etidyum homodimer-1	Canlandırıcı	L3224 B
Ficoll-Paque artı	Sitiva	17144003	Nötrofillerin izolasyonu için kullanılır (yoğunluk gradyan ortamı)
Hanks'in dengeli tuz çözeltisi (HBSS) 1x	Corning hücre bakloğu	21-022-Özgeçmiş	Kalsiyum, magnezyum ve fenol kırmızısı içermez
Hemositometre	Parlak Çizgi
Heparin	Nova artı	NDC 63323-540-57	1000 USP birimi / mL, Kan alımı için kullanılır
IMARIS 9.8	Oxford Enstrümanları		Mikroskopi görüntü analiz yazılımı
Minimal temel ortam (MEM) Alpha 1x	Gibco (Gibco)	41061-029
İğne (23 G1)	Bd	305145	Kan alımı için kullanılır
Nikon Tutulma Ti2	Nikon
NIS Elemanları	Nikon		Ölü nötrofillerin miktar tayini
Poli-L-lizin çözeltisi	Sigma	P4707-50ML
Sodyum klorür	Fisher Biyoreaktifleri	BP358-10	Nötrofil izolasyonu için kullanılır
Sulama için steril su, USP	Baxter	2F7114	Endotoksin içermez; Nötrofil izolasyonu için kullanılır
Surflo kanatlı infüzyon seti	Terumo	SC*19BLK	19 G x 3/4", kan alımı için kullanılır
Tripan mavisi lekesi (% 0.4)	Gibco (Gibco)	15250-061
Hindiba			Kan alımı için kullanılır
UltraPure damıtılmış su	Canlandırıcı	10977015
Beyaz opak 96 oyuklu plakalar	doğan	353296	Doku kültürü ile tedavi edilmiş ve düz tabanlı plaka
μ-Slayt VI 0.4	İbidi	80601	μ kanallı slayt

Serisi Serisi Serisi adet Serisi Serisi Serisi Serisi Belediyesi (İngilizce)