Cilt İltihabını İndükleyerek Bir Antijene Karşı Bağışıklık Tepkisini Değerlendirme Tekniği

Özet

Kaynak: Yao, Y., et al. IL-1β Promotör Güdümlü DsRed Muhabir Fareleri Kullanarak Nötrofil Hazırlamanın İntravital Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2016).

Bu video, bir fare modelinde cilt iltihabını indükleyerek bir test antijenini değerlendirmek için in vivo bir tekniği göstermektedir. Test antijeni - bir yağ / aseton çözeltisi içinde bir hapten - fare kulağının derisine topikal olarak uygulanır ve cildin iltihabı yeterli bir süre sonra değerlendirilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. pIL1-DsKırmızı Farelerde Deri İltihabının İndüksiyonu

1. 100 mg / kg ketamin, 10 mg / kg ksilazin ve 1 mg / kg asepromazin içeren bir anestezik kokteylin intraperitoneal (ip) enjeksiyonu ile fareyi uyuşturun. Yeterince anestezi uygulanmış fareler, ayak parmağını sıkıştırmak için arka pençe çekilmesi göstermez.
2. Farenin her iki kulağının sırt yüzeyine tüy dökücü krem sürün. 30 saniye ila 1 dakika bekleyin. Kulak yüzeyini suyla ıslatılmış pamukla silin ve kurumaya bırakın.
3. Bir mikrometre kullanarak kulak kalınlığını ölçün ve fareyi ayrı bir kafese yerleştirin. Anesteziden iyileşene kadar gözlemleyin (~ 15 - 30 dakika). Epilasyon ürününün neden olduğu cilt iltihabını gidermek için, daha fazla deney yapılmadan önce farenin 3 gün dinlenmesine izin verin.
4. 16.7 mg OX'u 1 ml aseton içinde çözerek ve 750 μl OX / aseton çözeltisini 250 μl zeytinyağı ile karıştırarak% 1.25 (a / h) oksazolon (OX) hazırlayın. 750 μl asetonu 250 μl zeytinyağı ile karıştırarak araç solüsyonunu hazırlayın.
5. Anestezik kokteylin intraperitoneal (i.p.) enjeksiyonu ile fareyi yeniden uyuşturun (1.1). Kulak kalınlığını daha önce olduğu gibi ölçün.
6. Sağ kulağın her iki tarafına 12,5 μl %1,25 OX uygulayın. Sol kulağın her iki tarafına 12.5 μl aseton / zeytinyağı araç solüsyonu uygulayın.
7. Diğer fareler tarafından kulaklarına hakaret edilmesini önlemek için tamamen iyileşene kadar fareyi kafes arkadaşlarından ayrı tutun, ardından fareyi orijinal kafesine yerleştirin ve hayvan barınağına geri koyun.
   not: Epilasyon, kulak kalınlığının değişmesi ile takiben küçük cilt iltihabına neden olabilir. Bu küçük iltihap 3 gün sonra çözülecek ve normal kulak kalınlığı ile onaylanacaktır. 24 saat boyunca topikal uygulamadan sonra, OX ile tedavi edilen kulaklar, tek başına araç solüsyonu ile tedavi edilen kulaklara kıyasla önemli (p < 0.01) şişme gösterir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ketamin hidroklorür	Hospira Belediyesi	NDC 0409-2051-05
Ksilazin	LLOYD Laboratuvarı	NADA #139-236
Asepromazin	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Tüy dökücü krem	Kilise ve Dwight
aseton	Balıkçı Bilimsel	A16P4
Oksazolon	Sigma-Aldrich	E0753

Serisi Gazetesi Serisi