Punch biyopsi ile bir fare modelinde eksizyonel deri yarası oluşturulması

Özet

Kaynak: Anderson, L. S. ve diğerleri, >Staphylococcus aureus Enfeksiyonuna Doğuştan Gelen Bağışıklık Tepkisini Değerlendirmek İçin Bir Fare Modeli. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, bir fare modelinde kesin bir yara oluşturmak için bir punch biyopsi prosedürü gösterilmektedir. Eksizyon, cildin deri altı tabakasını açığa çıkarır ve lokalize patojen enfeksiyonuna karşı bağışıklık tepkilerini incelemek için uygun bir alan sağlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Fare Kaynağı ve Muhafazası

1. Daha önce tarif edildiği gibi bir C57BL / 6J genetik arka plan üzerinde Lizozim M-ile geliştirilmiş yeşil floresan protein (LysM-eGFP) fareleri türetin. LysM-EGFP× miyeloid farklılaşma birincil yanıtı 88 (MyD88) - / - fareleri, LysM-EGFP farelerini MyD88BL / 6J arka plan üzerinde geçerek türetin.
2. Bir vivaryumda ev fareleri. Bu çalışmalar için, hayvanlar ameliyattan önce Kaliforniya Üniversitesi, Davis'te gruplar halinde barındırıldı ve ameliyattan sonra tek tek barındırıldı. 10-16 haftalık yaşlar arasında fareler kullanın.

2. Eksizyonel Cilt Yarası

1. İntraperitoneal enjeksiyon yoluyla her fareye 100 μL 0.03 mg / mL buprenorfin hidroklorür (~ 0.2 mg / kg) uygulayın.
2. Enjeksiyondan yirmi dakika sonra,% 2-4 izofluran içeren dakikada 2-3 litre (LPM) oksijen içeren bir odaya 2-4 fareyi yerleştirin. Fareler tamamen anestezi altına alındıktan sonra, fareleri birer birer% 2-4 izofluran ile 2-3 LPM oksijene bağlı bir burun konisine aktarın. Her bir arka pençeyi başparmak ve işaret parmağı arasında sıkıca sıkıştırarak farelerin tamamen uyuşturulduğunu doğrulayın. Hayvan çimdiklemeye cevap vermezse bir sonraki adıma geçin.
3. Farenin arkasındaki 1 inç'e 2 inçlik bir bölümü elektrikli kesme makineleriyle tıraş edin ve temiz bir mendil veya gazlı bez kullanarak kürk kırpıntılarını temizleyin. Tüy dökücü losyon kullanmaktan kaçının çünkü aşırı iltihaplanmaya neden olabilir.
4. Farenin arkasını önce %10 povidon-iyot ile ıslatılmış gazlı bez ve ardından %70 etanol ile ıslatılmış gazlı bez ile temizleyin. Alanı, cerrahi alanın merkezinden dışa doğru hareket ederek spiral bir düzende temizleyin. Ameliyattan önce cerrahi bölgenin kuruması için yaklaşık 1 dakika bekleyin.
5. Farenin traşlı sırtını iki parmağınız arasında gevşek bir şekilde tutun ve hazırlanan cerrahi alanın ortasına 6 mm'lik steril bir punch biyopsisine sıkıca bastırın. Cildi gergin bir şekilde çekmeyin.
   1. Zımba biyopsisini, cilt üzerinde, taslağın en az bir bölümünde cildi tamamen kesen dairesel bir taslak oluşturmak için bükün. Alttaki fasyayı veya dokuyu kesmemeye dikkat edin.
   2. Punch biyopsisi tarafından basılan dairesel deseni takip ederek epidermis ve dermisi kesmek için steril makas ve forseps kullanın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
6mm Tek Kullanımlık Biyopsi Punch	Integra Miltex	33-36
Buprenoprin hidroklorür enjekte edilebilir	Batı Tıbbi Tedarik	7292	0.3 mg / mL
C57BL/6J Fareler	Jackson Laboratuvarı	664
LysM-eGFP Fareler	Thomas Graff Albert Einstein New York Koleji	Na
MyD88 KO Fareler	Jackson Laboratuvarı	9088
Dokunmamış süngerler	AMD- Ritmed A.Ş	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Povidon İyot% 10 Çözelti	Uygulama	697731

adet . Serisi