Bakterilerle enfekte olmuş hücrelerde kalsiyum tepkisini incelemek için bir görüntüleme tekniği

Özet

Kaynak: Smail, Y., et al. Epitel Hücrelerinin Shigella Enfeksiyonu Sırasında Ca²⁺ Yanıtları Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, insan epitel hücrelerinin Shigella enfeksiyonu üzerine lokal ve küresel kalsiyum iyonu tepkisini tespit etmek için bir tekniği göstermektedir. Shigella, konakçı hücreleri istila eder ve hücre içi kalsiyum seviyelerini etkileyen istila efektörlerini serbest bırakır. Lokal ve global sitozolik kalsiyumun genliği ve frekansı bir floresan indikatör kullanılarak incelenir.

Protokol

1. Hazırlıklar

1. Bakteri hazırlama
   1. AfaE adezinini (M90T-AfaE) ifade eden Shigella vahşi tip suşu olan bakterileri% 0.01 Kongo kırmızısı (CR) içeren bir triptikaz soya (TCS) agar plakası üzerine yerleştirin ve 37 ° C'de 18 saat inkübe edin.
      not: Tekrarlanabilirliklerini arttırmak için, adım 1.1.1'de elde edilen Shigella plakaları 4 °C'de saklanır ve bir hafta içinde kullanılmalıdır çünkü CR ortamındaki tüm koloniler zamanla kırmızıya dönecektir.
   2. Çizgi plakalarından 3 kırmızı koloni toplayarak TCS suyu ön kültürünü aşılayın.
      not: Virüla....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Fluo-4	Canlandırıcı	F14201
Metamorf sürüm 7.7	Evrensel Görüntüleme
CoolLED aydınlatma sistemi pE-2	Roper Bilimsel
Mikro çanak 35 mm, yüksek	AYNI ŞEY	81156
Triptikaz Soya (TCS) suyu	Termo Balıkçı	B11768
TCS agar	Termo Balıkçı	B11043
Kongo kırmızısı	Sigma-Aldrich	75768
M90T-AFAE	Güneş ve ark. 2017		Shigella flexneri serotip V. AfaE adezinini ifade eder
İPM-AFA	Güneş ve ark. 2017		AfaE adezinini eksprese eden izojenik ipgD mutant suşu