Mezenkimal Kök Hücreler ile Makrofaj Fagositozunun Düzenlenmesini İncelemek İçin Bir Test

Özet

Kaynak: Evans, J. F., et al. Makrofaj Fagositozunun Mezenkimal Kök Hücre Düzenlemesi; Kantitasyon ve Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu video, bir ko-kültürde makrofaj fagositozunun mezenkimal kök hücre (MSC) regülasyonunu incelemek için yapılan bir testi göstermektedir. MSC'nin makrofajlarla birlikte kültürlenmesi üzerine, pH'a duyarlı bir florofora konjuge edilmiş opsonize olmayan zimozan partikülleri, makrofajlar tarafından fagosite edilmek üzere eklenir. Fagositozdaki artışla birlikte, floresan yoğunluğu artar ve fagositik aktivitenin MSC aracılı regülasyonunun belirlenmesine izin verir.

Protokol

>NOT: Tüm besiyeri hazırlama ve hücre kültürü teknikleri, laminer akışlı bir biyogüvenlik kabini kullanılarak aseptik koşullar altında gerçekleştirilir. Açıklanan tüm kültür inkübasyon adımları, 37 °C, %5_CO2 ve %95 nem atmosferini korumak için tasarlanmış bir inkübatör kullanılarak gerçekleştirilir.

1. Hücre kültürü

1. Büyüme ortamının hazırlanması
   1. MSC (mezenkimal kök hücreler) ve LADMAC (fare kemik iliği türevi makrofajlar; hücre hattını oluşturan araştırmacıların isimlerinden türetilmiştir: Laskin, Dower ve Malech) için, 50 mL FBS ve 5 mL 100x antibiyotik/antimikotik karışım....

Sonuçlar

Şekil 1: Ko-kültür ve fagositoz testi iş akışına genel bakış. MSC ile ko-kültürde MΦ fagositoz aktivitesinin kantitatif ve kalitatif analizi için iş akışının bir taslağı.

Ek Dosya 1: Optimal bir deneyden elde edilen ham kinetik verilerin temsili bir elektronik tablo dosyası.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
96 oyuklu Siyah Polistiren Mikroplaka	MilliporeSigma	CLS3603-48EA
% 0.4 tripan mavisi çözeltisi	MilliporeSigma	T8154-20ML
15 mL ve 50 mL Konik Steril Polipropilen Santrifüj Tüpleri	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	339653
Antibiyotik-Antimikotik (100X) Gibco	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	15240096
Hücre kaldırıcı	MilliporeSigma	CLS3008-100EA
Kültür şişeleri, doku kültürü işlenmiş, yüzey alanı 75 cm2, eğimli boyunlu, kapaklı, filtreli	MilliporeSigma	C7231-120EA
D1 ORL UVA [D1]	ATCC (Uzay Servisi)	CRL-12424	Fare MSC Hücre Hattı
DMEM, Yüksek Glikoz	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	11965092
Fetal Sığır Serumu, nitelikli, ısıyla inaktive edilmiş	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	16140071
Hemositometre	Balıkçı Bilimsel	02-671-51B
I-11.15	ATCC (Uzay Servisi)	CRL-2470	Fare MΦ Hücre Hattı
LADMAC Hücre Hattı	ATCC (Uzay Servisi)	CRL-2420	LADMAC hücreleri, büyüme faktörü koloni uyarıcı faktör 1'i (BOS-1) salgılar.
Canlı Hücre Görüntüleme çözümü	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	A14291DJ
PBS, pH 7.4	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	10010031
pH Rhodo Green Zymosan Biyopartiküller Konjugatı	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	P35365 Serisi
Spectramax i3X	Moleküler Cihazlar
Steril Tek Kullanımlık Vakum Filtre Üniteleri, 250 mL, 0,2 μm	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	568-0020
Steril şırınga filtreleri, 0,2 mikrometre	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	723-2520
Doku kültürü ile muamele edilmiş kültür kapları, 100 mm x 20 mm	MilliporeSigma	CLS430167-100EA
Tripsin-EDTA (% 0.05), fenol kırmızısı	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	25300054

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi