Salgılanan Embriyonik Alkalen Fosfataz Raportör Testi Kullanılarak Biyoaktif Tip-I İnterferonların Miktar Tayini

Abstract

Kaynak: Bego, M. G. ve diğerleri, HIV-1 ile Enfekte CD4⁺ T Hücrelerinin Plazmasitoid Dendritik Hücreler Tarafından Doğuştan Algılanmasının Ex vivo Ko-kültür Sistemi Kullanılarak Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu video, plazmositoid dendritik hücrelerin HIV-1 Enfekte CD4⁺ T hücreleri tarafından uyarılmasını takiben salınan tip-I interferonları (IFNler) ölçmek için HEK-Blue interferon-α/β raportör hücreleri kullanılarak salgılanan embriyonik alkalin fosfataz testini göstermektedir.

Protocol

1. HEK-Blue IFN-α/β raportör hücreleri kullanılarak biyoaktif tip-I IFN ölçümü.

Not: Bu hücreler, tamamen aktif bir tip I IFN sinyal yolu elde etmek için HEK293 hücrelerinin insan STAT2 ve IRF9 genleri ile stabil transfeksiyonu ile oluşturulmuştur. Ayrıca, IFN-α/β ile indüklenebilir ISG54 promotörü kontrolü altında salgılanan alkalin fosfataz (SEAP) raportör genini de içerirler. Bu hücrelerin tip-I IFN ile uyarılması, JAK / STAT / ISGF3 yolunu aktive eder ve SEAP üretimini indükler.

1. HEK-Blue IFN-α/β hücrelerini DMEM'de %10 FBS ile desteklenmiş halde tutun. Bunları, nihai hacmi 180 μl olan düz ta....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MT4 hücreleri	NIH AIDS Reaktif Programı	120	Bu reaktif, Dr. Douglas Richman'dan NIH AIDS Reaktif Programı, AIDS Bölümü, NIAID, NIH: MT-4 aracılığıyla elde edildi.
HEK-Blu IFN-α/β raportör hücreleri	Canlılık	HKB-IFNAB
DEV/SINIR	avrupa bizonu	350-000-CL
DMEM (Ömer Çiçeğ	avrupa bizonu	319-005-CL
FBS (FBS)	avrupa bizonu	080-150
PHA-L (Faz-Alan)	Sigma-Aldrich	O2769
CD4+ T hücre izolasyon kiti II	Myltenyi (Myltenyi)	130-091-155
Elmas Plazmositoid Dendritik Hücre İzolasyon Kiti II	Myltenyi (Myltenyi)	130-097-240
QUANTI-Mavi	Sedir şeridi	REP-QB2
2.5 mg / ml insan IgG	Sigma-Aldrich	I 4506