Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Enfeksiyon için Mycobacterium bovis BCG lux İnokulumunun Hazırlanması ve Miktar Tayini

1.1K görüntülenme

⸱

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

Kaynak: Asai, M. ve diğerleri, Mycobacterium tuberculosis Kompleksini İncelemek İçin Omurgasız Galleria mellonella'nın Enfeksiyon Modeli Olarak Kullanımı. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, biyolüminesans testi ve koloni oluşturan birimlerin sayımı kullanılarak Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guérin lux inokulumunun hazırlanmasını ve miktar tayinini göstermektedir. Hazırlanan aşı enfeksiyon çalışmaları için kullanılabilir.

Protokol

NOT: Aşağıda açıklanan tüm çalışmalar, yerel sağlık ve güvenlik yönergelerine uygun olarak sınıf 2 mikrobiyolojik güvenlik kabini (MSC) içindeki bir CL2 laboratuvarında gerçekleştirilmelidir.

>1. M. bovis BCG lux'un Enfeksiyon için Hazırlanması

  1. Lusiferaz enzimini kodlayan Vibrio harveyi'den luxAB genlerini taşıyan mekik plazmidi pSMT1 ile dönüştürülen Montreal aşı suşu olan M. bovis BCG lux'un donmuş 1.2 mL gliserol (%15) stokunun buzunu çözün.
  2. % 0.2 gliserol,% 10 albümin, dekstroz, katalaz (ADC) zenginleştirme ve 50 μg / mL higromi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1.5ml reaksiyon tüpü (Eppendorf)Eppendorf Belediyesi22431021
20, 200 ve 1000 μl pipet ve filtreli uçlarHerhangi bir tedarikçiYok
24 oyuklu kültür plakasıGreiner662160
25 ml pipet ve pipet çocuğuHerhangi bir tedarikçiYok
3 bölmeli Petri kabı (94/15mm)Greiner637102
merkezkaçHerhangi bir tedarikçiYok
Sınıf II güvenlik kabiniHerhangi bir tedarikçiYok
Etanol (>99.7%)VWR (VWR)208221.321
GliserolSigma-AldrichG5150
Higromisin BCorning30-240 CR
Luminometre (Autolumat LB 953)Berthold34622
Luminometre tüpleriCorning352054
MikrosantrifüjHerhangi bir tedarikçiYok
Middlebrook 7H11 agarBD Biyobilim283810
Middlebrook 7H9 suyuBD Biyobilim271310
Middlebrook ADC zenginleştirmeBD Biyobilim212352
Middlebrook OADC zenginleştirmeBD Biyobilim212240
Mikobakteri bovis BCG luxçeşitliYok
n-desil aldehitSigma-AldrichD7384-100G
Orbital sallama inkübatörüHerhangi bir tedarikçiYok
Fosfat tamponlu tuzlu suSigma-AldrichP4417-100SEKME
Polisorbat 80 (Ara-80)Sigma-AldrichP8074-500ml
Havalandırmalı kapaklı erlenmeyer şişesi (250 ml)CorningCLS40183
Winterm (v1.08)BertholdYokLB953.TTB Programı
Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi

Daha fazla makale keşfet

Biyolüminesans AnaliziKoloni Oluşturan BirimlerHigromisin İlaveli BesiyeriSeri DilüsyonlarLüminometre ÖlçümüMiddlebrook 7H9 BulyonuFosfat Tamponlu SalinSantrifüjleme ile YıkamaAgar Plak Sayımı