Sıtma-HIV Ko-Enfeksiyonunun İn Vitro Hücre Kültürü Modelinin Oluşturulması

Özet

Kaynak: Finney, C. et al., HIV Ko-enfeksiyonu Bağlamında Sıtmaya Karşı Bağışıklık Tepkilerini Ölçmek için İn Vitro Bir Model.J. Vis. Uzm.(2015)

Bu video, in vitro sıtma-HIV ko-enfeksiyon hücre kültürü modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Plasmodium falciparum parazitize eritrositlerle birlikte kültürlenen HIV ile enfekte periferik kan mononükleer hücreleri, potansiyel olarak birbirlerinin büyümesini destekler ve HIV ve sıtma ko-enfeksiyonlarında bağışıklık tepkileri ve hastalığın ilerlemesi hakkında bilgi sağlar.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

DİKKAT: İnsan kan örnekleri ve insan sıtma parazitleri ile çalışmak ihtiyati tedbirler gerektirir. Daima laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin ve 2. seviye Biyogüvenlik kabininde çalışın. İnsan sıtmasına kazara perkütan maruz kalma durumunda, profilaktik tedavi için Sağlık ve Güvenlik'e rapor verin. İnsan immün yetmezlik virüsü HIV (+) kanı ile çalışmak için ek güvenlik hususları da uygulanmalıdır. Arkaya kapanan bir laboratuvar önlüğü giyin. Çift eldiven (üst eldiven lateks olmalıdır). Tüm işlemleri seviye 2 Biyogüvenlik....

Sonuçlar

Şekil 1. PBMC'lerin konumunu gösteren Ficoll gradyan sonrası dönüşün tasviri.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Alanin	Sigma	A7377
BD Vacutainer ACD Çözüm A	Bd	364506
BD Vacutainer Sodyum Heparin	Bd	17-1440-02
DPBS (kalsiyum yok, magnezyum yok)	Corning	21-031-Özgeçmiş
Fetal Sığır Serumu	Sigma	F1051	Kullanmadan önce ısıyı etkisiz hale getirin
Ficoll-Paque ARTI	GE Sağlık	17-1440-02
Gentamisin (10mg/ml)	Gibco (Gibco)	15710-064
Hema3 Boyama Seti	balıkçı	122-911
HEPES ÜNİVERSİTESİ	balıkçı	BP310-500
Hipoksantin	Sigma	H9636
İyonomisin	Sigma	I3909 Serisi
MEM esansiyel olmayan amino asitler (10mM)	Gibco (Gibco)	11140
Pma	Sigma	P8139 Serisi
RPMI-1640 tozu	Yaşam Teknolojileri	31800-022
L-glutamin ve HEPES ile RPMI-1640	Termo Bilimsel	SH30255.01
Sodyum bikarbonat (toz, hücre kültürü)	Sigma	S5761 Serisi
Sodyum Piruvat (100mM)	Gibco (Gibco)	11360
Tris (Trizma tabanı)	Sigma	T6066
Trizol (Trizol)	Ambion Teknolojisi	15596018
Tripan Mavisi (%0,4)	Gibco (Gibco)	15250-061
Parazit Gaz Karışımı	Özel sipariş ile		%3 CO2, %1 O2, denge N2

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi