Allojenik Kemik İliği ve Splenik Hücre Nakli ile Fare Modellerinde Graft Versus Host Hastalığının İndüksiyonu

Özet

Kaynak: Buchele, V., et al. Canlı Farelerde Bağırsak Greft-versus-host Hastalığının İndüksiyonu ve Mini-endoskopik Değerlendirmesi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu video, allojenik hematopoietik kök hücreler ve GvHD'yi indükleyen splenik alloreaktif T lenfositleri kullanılarak letoral ışınlanmış bir alıcı farede bağırsak greftine karşı konak hastalığının (GvHD) indüksiyonunu göstermektedir. Bu protokol, hastalığın mekanizmasını anlamak ve yenilikçi terapötik seçenekler geliştirmek için ciddi bir akut intestinal GvHD modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. GvHD indüksiyonu

1. 0. Gün: Alıcı farelerin toplam vücut ışınlaması
   1. Alıcı olarak en az 10 haftalık olan dişi CD45.2 + H2kd + BALB / c fareleri kullanın.
   2. GvHD indüksiyonundan önce alıcı farelerin ağırlığını tartın ve kaydedin.
      not: Alıcının minimum vücut ağırlığının 20 g olduğundan emin olun. Başlangıç vücut ağırlığı, GvHD indüksiyonu ve ilerlemesi boyunca her bir farenin ağırlık kaybını ....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
BIOBEAM 2000 Gama Işınlayıcı	Gama-Hizmet Meical GmbH
Fosfat tamponlu salin (PBS)	Sigma-Aldrich Co., LLC.	D8662-6x500ML
Semken Forseps (uzunluk: 13 cm; tırtıklı, kıvrık uçlar)	Güzel Bilim Araçları	11009-13
Sertleştirilmiş İnce Makas (uzunluk: 8,5 cm; düz uçlar; kesici kenar: 24 mm)	Güzel Bilim Araçları	14090-09
RPMI-1640 Orta	Sigma-Aldrich Co., LLC.	R8758-500ML
Hipodermik iğne (26G)	B. Braun Melsungen AG	4657683
1 mL şırınga	B. Braun Melsungen AG	9166017V
50 mL tüp	Sarstedt Ag & Co.KG	6,25,47,254
40 μm gözenekli ekranlı hücre süzgeci	BD Şahin	352340
Steril iç kısımlı insülin şırıngası (30G)	Bd	324826
Pan T Hücre İzolasyon Kiti II, fare	Miltenyi Biotec GmbH	130-095-130	splenik T hücrelerini izole etmek için mıknatıs hücresi ayırma
CD90.2 Mikro Boncuklar, fare	Miltenyi Biotec GmbH	130-049-101	T hücresi tükenmiş kemik iliği hücrelerini izole etmek için mıknatıs hücresi ayırma
Biyopsi Forseps	KARL STORZ SE & Co KG	61071 ZJ	Kolonoskopi için deney düzeneğinin bir parçası
Etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat (Na2EDTA)	Carl Roth GmbH & Co.KG	8043.2	ACK parçalama tamponunun içeriği
Alexa Fluor 700 anti-fare CD45.2 Antikoru (klon: 104; lot: B252126; RRID: AB_493731)	Biyoefsane	109822
PE/Cy7 anti-fare CD45.1 Antikoru (klon: A20; lot: B217246; RRID: AB_1134168)	Biyoefsane	110730
APC/Cy7 anti-fare CD8a Antikoru (klon: 53-6.7, lot: B247008; RRID: AB_312753)	Biyoefsane	100714
Foran / İzofluran	AbbVie Inc.	B506
Filtrelenmiş sığır serumu	Pan Biyotec	P40-47500	FACS tamponunun içeriği

Serisi (İngilizce) Serisi Serisi