İnsan Bronkoalveoler Lavaj Sıvılarından Makrofajlarda Hücre Dışı Tuzakların Görüntülenmesi

Özet

Kaynak: Sharma, R. ve diğerleri, Konfokal Mikroskopi Kullanarak Makrofaj Hücre Dışı Tuzaklarını Görselleştirme. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, bronkoalveoler lavaj sıvısından bronkoalveoler makrofajlardaki makrofaj hücre dışı tuzakların, MET'lerin immünokilloetiketlenmesini ve bunların konfokal mikroskop kullanılarak görselleştirilmesini göstermektedir.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Bronkoalveoler Lavaj (BAL) Makrofajları

1. (1) insan deneklerde bronkoskopi ile ve (2) farelerde intratrakeal aspirasyon kullanarak akciğer makrofajları elde etmek için BAL kullanın.
   not: Makrofajların edinimi genellikle bu hücrelerin bir miktar aktivasyonuna neden olur. Makrofajlar, potansiyel bir tıbbi sorunu araştırmak için bronkoskopi gerektiren hastalardan elde edilir ve tüm denekler makrofaj hücre dışı tuzakların veya MET'lerin analizi için uygun olmayabilir (bu....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
İnsan örnekleri: Birincil antikorlar
Tavşan anti-insan H3Cit (Sitrülin R26)	Abcam Belediyesi	AB5103	10 ug/ml
Fare anti-insan MMP9	Novus Biyolojik	AB119906	1:200 asit, konsantrasyon verilmedi
Tavşan anti-insan PADI2 / PAD2	Abcam Belediyesi	AB16478	7 ug/ml
Fare anti-insan PADI4 / PAD4	Abcam Belediyesi	AB128086	10.1 ug/ml
İkincil antikorlar
Tavuk anti-tavşan AF 488/	Yaşam teknolojileri	A-21441
Tavuk anti-tavşan AF 594	Yaşam teknolojileri	A-21442
Tavuk anti-keçi AF 594	Yaşam teknolojileri	A-21468
Tavuk anti-fare AF488	Yaşam teknolojileri	A-21200
Yazılım Programları
İmaris Belediyesi	Bit düzlemi
Resim J	Nıh
Florforların ortalama yoğunluğu için Microsoft Excel gibi standart bir ofis uygulaması kullanılabilir
Mikroskoplar
C1 Konfokal tarama mikroskobu	Nikon
FV1200 Konfokal taramalı mikroskop	Olympus
Monash Tıp Merkezi'ndeki bronkoskopi odasından insan BAL örnekleri
medya
DEV/SINIR	Sigma-Aldrich	R8758
Fetal baldır serumu	Sigma-Aldrich	F0926
L-glutamin	Sigma-Aldrich	G7513
Diğer reaktifler
paraformaldehit/periyodahit/lizin (PLP) fiksatif	Sigma-Aldrich	27387
Doğal formalin	Sigma-Aldrich	42904
Lamel 12 ml	Sigma-Aldrich	S1815 Serisi
Lamel 60 x 24 ml	Sigma-Aldrich	C6875 Serisi

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi