Lenf sıvısını toplamak için bir sıçan modelinde mezenterik lenf kanalı kanülasyonu

Özet

Kaynak: Trevaskis, N. L., et al. Mezenterik Lenf Kanalı Kanüllü Sıçan Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Taşınmasının Değerlendirilmesine Uygulama. J. Vis. Uzm. (2015).

Bu video, sıçanlarda mezenterik lenf kanalını kanüle etmek için bir tekniği göstermektedir. Bu yöntem, lenf sıvısında bulunan bileşenlerin tüm hacmine doğrudan erişim sağlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Mezenterik Lenf Kanalının Kanülasyonu

1. Hayvanı sağ tarafı operatöre bakacak şekilde yerleştirin. Ameliyatı gerektiği gibi cerrahi mikroskop yardımı ile veya yardımı olmadan gerçekleştirin.
2. Karın kas duvarının üst tabakasını, steril bir neşter bıçağı kullanarak göğüs kafesinin yaklaşık 2 cm altından (kostal kenar) orta hattan sağ yana uzanan 4 cm'lik düz bir kesi ile açın (bkz. Şekil 1B).
3. Karın kas duvarının kalan katmanlarını küçük bir cerrahi makasla orta hatta yanal olarak 4 - 5 mm lateral ve sağ kanada açın (bkz. Şekil 1B).
4. İnce bağırsağı sol karın kası duvarının altına geri çekin ve normal tuzlu su ile doyurulmuş 2-3 parça steril gazlı bez kullanarak yerinde tutun.
5. Mezenterik lenf kanalının görselleştirilmesini kolaylaştırmak için farenin sırtının altına yatay olarak yerleştirilmiş 10 ml'lik plastik bir şırınga üzerinde sağ böbrek seviyesinde fareyi köprüleyin.
6. Superior mezenterik lenf kanalını bulun: sağ böbreğe dik ve hemen rostral ve mezenterik artere paralel olan yaklaşık 0,5 - 1 mm çapında bir damar (titreşimli koyu kırmızı bir kan damarı; bkz. Şekil 1C).
   NOT: Açlık olmayan veya yağ ile önceden dozlanmış sıçanlarda damar beyaz, opaktır ve oldukça yarı saydam olduğu açlık sıçanlara göre görselleştirilmesi daha kolaydır.
7. İkinci, daha küçük bir aksesuar lenf kanalının mevcut olup olmadığını belirlemek için büyük üst mezenterik lenf kanalına ve mezenterik artere hemen kaudal alanı inceleyin. Varsa, bağırsaktan akan lenf hacminin tamamının superior mezenterik lenf kanalından toplanmasını sağlamak için kanalı keserek ve süper yapıştırıcı ile tıkayarak veya kanalın etrafına bir dikiş bağlayarak kanaldan lenf akışını engelleyin.
8. Sağ böbreğin alt kenarındaki peri-renal yağ yatağından ve vena kavanın hemen altındaki bağ dokusu katmanlarından, superior mezenterik lenf kanalına paralel bir yönde bir çift düz forseps geçirin.
9. Forsepsin ucunu kullanarak, lenf kanülünü tutun ve bir ucu mezenterik lenf kanalına hemen bitişik ve diğer ucu sağ böbrek seviyesinde hayvandan dışlanmış olacak şekilde peri-renal yağ yatağından çekin.
10. Künt diseksiyon ile mezenterik lenf kanalını üstteki bağ ve yağ dokusu katmanlarından izole edin. Lenf kanalını delmemeye veya zarar vermemeye dikkat edin.
11. Lenf kanalını izole ettikten sonra, mikro makas, kuyumcu forsepslerinin keskin ucu veya 25 G'lık bir iğne ile lenf kanalında küçük bir delik açın. Gemiyi tamamen kesmemeye dikkat edin.
12. Lenf kanülünün hava boşluğu olmayan pıhtılaşma önleyici bir solüsyonla (şırınga ve 25 G iğne kullanarak) tamamen doldurulduğundan emin olun. Lenf kanülünü, küçük bir forseps yardımıyla küçük bir delikten mezenterik lenf kanalının yaklaşık 2 - 4 mm içine yerleştirin.
13. Lenf kanülünü birkaç dakika gözlemleyin. Kanülasyon başarılı olursa, kanülün serbest toplama ucundan kademeli bir bağırsak lenfi akışı gözlemleyin. Kanülasyon başarılı olmazsa, 1.8 - 1.12 arasındaki adımları tekrarlayın.
14. Kanülasyon başarılı olursa, lenf kanalına giriş deliğinin üzerine küçük bir damla veteriner yapıştırıcısı koyarak kanülü sabitleyin. Fazla veteriner yapıştırıcısı uygulayarak damarı tıkamamaya dikkat edin.
15. Veteriner yapıştırıcısının sertleşmesini beklerken, kanülasyon prosedürünün başarılı olduğundan emin olmak için lenf akışını birkaç dakika gözlemleyin. Kanülasyonun başarısından emin olduktan sonra, karın boşluğuna yerleştirilen gazlı bez parçalarını dikkatlice çıkarın ve ince bağırsağı orijinal konumuna yerleştirin.
16. Lenf toplama tüplerini önceden tartın, lenf ve kan örneği alımı için tüpleri etiketleyin ve pıhtılaşma önleyici solüsyon ekleyin. Steril suda 1 mg / ml EDTA veya toplanan lenf veya kanda 10 - 20 IU / ml heparin nihai konsantrasyonunu elde etmek için yeterli anti-pıhtılaştırıcı çözelti ekleyin.
17. Serbest akışlı lenfleri toplamak için kanülün ucuna pıhtılaşma önleyici (adım 1.16) içeren bir lenf toplama tüpü yerleştirin.
18. Daha sonra, rehidrasyon solüsyonlarının ve / veya formülasyonların infüzyonu için duodenumu kanül edin.

Sonuçlar

Şekil 1. (A) lenf kanalını kanüle etmek için traş edilen karın, (B) lenf kanalına ulaşmak için orta hattan sağ yana uzanan 4 cm'lik düz bir kesi ile açılan karın kas duvarı ve (C) sağ böbreğe dik olan superior mezenterik lenf kanalının (sarı daire içinde) fotoğrafları.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Steril tuzlu su	Baxter sağlık hizmetleri	AHB 1307	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Baxter 100 ml tuzlu su torbaları, 50'lik kutu
Suda %70 etanol	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
Klorheksidin glukonat çözeltisi (Microshield 4)	Livingstone Uluslararası	JJ60243L	Herhangi bir marka kullanılabilir. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT = 6 & arama =JJ60243L
Betadine çözeltisi	Livingstone Uluslararası	BU0510	Herhangi bir marka kullanılabilir. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT= 6 & arama = BU0510
Ilium Ketamil (Ketamin 100 mg / ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
Heparin (35 mL'de 35000IU	Sigma İlaç	337220	http://www.sigmaco.com.au
Polietilen (PE) kanül dış çap 0,96 mm x iç çap 0,58 mm	Mikrotüp uzantıları	PE8050	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek PE boru 0.96 x0.58 mm, 30 m
Polietilen (PE) kanül od 0.8 mm x iç çap 0,5 mm	Mikrotüp uzantıları	PE9658	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek PE boru 0,8 x0,5 mm, 30 m
işaretleyiciler	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
Veteriner yapıştırıcı	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
23 gauge iğne	Livingstone Uluslararası	DN23GX0.75LV	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Livingstone Tek Kullanımlık İğne, Steril, 23GX0.75inch, 100/BOX'tır. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT= 6 & arama = DN23GX0.75LV
25 gauge iğne	Livingstone Uluslararası	DN25GX1.0LV	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Livingstone Tek Kullanımlık İğne, Steril, 25GX1.0inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT = 6 & arama = DN25GX1.0LV
1 ml şırınga	Livingstone Uluslararası	T3SS01TA	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Terumo şırınga 1 ml Slip Tuberculin 100 / Box'tır. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT = 6 & arama =T3SS01TA
10 ml şırınga	Livingstone Uluslararası	T3SS10SA	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Terumo şırınga 10 ml Slip 100 / Box'tır. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT = 6 & arama =T3SS10SA
Gazlı bez çubukları	Livingstone Uluslararası	GSC075	Herhangi bir marka kullanılabilir ve istenen boyutta kesilebilir. Buradaki örnek gazlı bez pamuk dolgulu 7.5x7.5 cm, 8 katlıdır. http:// www.livingstone.com.au/? PG = search_result & CAT = 6 & arama = GSC075
Isıtma yastığı	Ratek	WT1 (İngilizce	Sıcaklığı 37C'de tutan herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Ratek ısıtma tepsisidir.
Cerrahi mikroskop	Zeiss	495005-0014-000	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, Stand S Çift Spot ve KL 300 LED'li Zeiss Stereomikroskop Stemi 2000-C'dir. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? L=en&p=us&f=e&i=10143
1 x Küçük cerrahi makas	Güzel Bilim Araçları (FST)	14060-09	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek FST İnce Makas, 9 cm, 21 mm kesme kenarlı, keskin, düz. http://www.finescience.ca/ Özel Sayfalar/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 x Tırtıklı kavisli uçlu forseps	Güzel Bilim Araçları (FST)	11001-13	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, kavisli 2.8x1.4 mm uçlu FST 13 cm standart desen forsepstir. http://www.finescience.ca/ Özel Sayfalar/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Belediyesi )