İmmünopatoloji Çalışmaları için Bir Sıçan Modelinde İntraduodenal Kanülasyon

Özet

Kaynak: Trevaskis, N. L. ve ark., Mezenterik Lenf Kanalı Kanüllü Sıçan Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Taşınmasının Değerlendirilmesine Uygulama.J. Vis. Uzm.(2015)

Bu videoda bir sıçan modelinde intraduodenal kanülasyon gösterilmektedir. Sıçanı uyuşturduktan sonra, duodenum yerleştirilir ve küçük bir delik oluşturulur. Eğimli uçlu J şeklinde bir kanül dikkatlice yerleştirilir ve sabitlenir ve kesi kapatılır. Kanüllü sıçan modeli, immünopatoloji çalışmaları için intra-intestinal infüzyonu mümkün kılar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi İşlemden Bir Gün Önce Yapılan Hazırlıklar

1. Gerekirse fareyi ameliyattan önceki gece oruç tutun. Farenin suya serbestçe erişebildiğinden emin olun.
2. Sıçana uygulanacak çözeltileri hazırlayın.
   1. Steril tuzlu su veya Ringers çözeltisi gibi bir rehidrasyon çözeltisi hazırlayın.
   2. Gerektiği gibi anestezik solüsyonlar hazırlayın. Burada anlatılan deneylerde kullanılan anestezik, 1.9 ml ketamin 100 mg/ml, 0.5 ml Ksilazin 100 mg/ml, 0.2 ml asepromazin 10 mg/ml ve 2.5 ml salinin birleştirilmesiyle hazırlanan "Kokteyl 1" ve 1 ml ketamin 100 mg/ml ve 0.1 ml asepromazin 10 mg/ml'den oluşan "Kokteyl 2"den oluşmuştur. NOTLAR: İnhale izofluran veya sevofluran, daha uzun süre cerrahi anestezi düzlemi sağlayabileceği için tercih edilebilir.
3. Lenf kanülünü yıkamak için steril suda 10 mg / ml etilendiamintetraasetik asit (EDTA) veya salin içinde 10 IU / ml heparin içeren bir pıhtılaşma önleyici çözelti hazırlayın. Ayrıca, karotis arter kanülünü yıkamak için salin içinde 2.5 - 10 IU / ml heparin içeren bir antikoagülan solüsyon hazırlayın.
4. Polietilen kanülü duodenuma yerleştirmek için hazırlayın (0,96 mm OD, 0,58 mm İç Çap)
   1. Kanülü gereken uzunlukta kesin (duodenal kanül için tipik olarak 25 - 30 cm) ve steril bir cerrahi bıçak kullanarak kanülün ucuna bir eğim yerleştirin (bkz. Şekil 1).
      not: Bu, kanül yerleştirme kolaylığını artırır ve yerleştirme sonrası kanül tıkanıklığı insidansını azaltır.
   2. Kanülün küçük bir kısmını kendi üzerine geri döndürerek, daha hafif veya sıcak bir plaka ile ısıtarak ve ardından boyutuna göre keserek intraduodenal kanüle J şeklinde bir ankraj noktası yerleştirin (bkz. Şekil 1).
5. Lenf kanülünü 25 G'lik bir iğneye ve pıhtılaşma önleyici solüsyon içeren şırıngaya takın (adım 1.3'te hazırlanmıştır). Lenf toplanması sırasında lenf kanülünde pıhtı oluşumu insidansını azaltmak için lenf kanülünü pıhtılaşma önleyici solüsyonla doldurun ve solüsyonu gece boyunca kanülde bırakın (O/N).
6. Lenf ve kan örneği alımı için tüpler hazırlayın. Lenf toplama tüplerini önceden tartın, lenf ve kan örneği alımı için tüpleri etiketleyin ve pıhtılaşma önleyici solüsyon ekleyin. Steril suda 1 mg / ml etilendiamintetraasetik asit (EDTA) veya toplanan lenf veya kanda 10 - 20 IU / ml heparin nihai konsantrasyonunu elde etmek için yeterli pıhtılaşma önleyici çözelti ekleyin.

2. Cerrahi işleme başlamadan hemen önceki hazırlıklar

1. Patentli olduklarından emin olmak için kanülleri steril salin veya pıhtılaşma önleyici solüsyonla yıkayarak kontrol edin.
2. Fareyi cerrahi prosedür için hazırlayın.
   1. Ameliyat ve numune toplama süresi boyunca fareyi uyuşturun.
      1. Örneğin, anesteziyi, 25 G'lik bir iğneye bağlı 1 ml'lik bir şırınga kullanarak sıçan boynunun arkasındaki bir deri kıvrımına 1.5 ml / kg Kokteyl I'in (adım 1.2.2'den itibaren) deri altı enjeksiyonu yoluyla başlatın. Anesteziyi, 25 G'lik bir iğneye bağlı 1 ml'lik bir şırınga kullanarak, gerektiği gibi yaklaşık olarak her saat yaklaşık 0.44 ml / kg Kokteyl 2'nin (adım 1.2.2'den itibaren) intraperitoneal enjeksiyonu yoluyla koruyun.
      2. Ameliyata başlamadan önce solunum hızı, bıyık hareketi, kas tonusu ve ayağın sıkışması gibi uyaranlara verilen tepkileri gözlemleyerek anestezi derinliğinin yeterli olduğundan emin olun. Gerektiği gibi ek anestezi uygulayın.
   2. Duodenum kanülasyonu için karnın sağ tarafını içeren cerrahi bölgelerden kürkü tıraş edin.
   3. Cerrahi bölgeleri povidon-iyot çözeltisi veya klorheksidin çözeltisi ve% 70 etanol ovma kullanarak aseptik olarak temizleyin. Bunu her bölge için 3 kez tekrarlayın ve %70 etanol ile son bir temizlik ile bitirin.
3. Hayvanı, ısıtılmış bir cerrahi pedin (37 °C) üzerinde temiz bir çarşaf üzerine sırt yaslanmış olarak yerleştirin.

3. Duodenumun kanülasyonu

1. Hayvanı sağ tarafı operatöre bakacak şekilde yerleştirin. Ameliyatı gerektiği gibi cerrahi mikroskop yardımı ile veya yardımı olmadan gerçekleştirin.
2. Karın kas duvarının üst tabakasını, steril bir neşter bıçağı kullanarak göğüs kafesinin yaklaşık 2 cm altından (kostal kenar) orta hattan sağ yana uzanan 4 cm'lik düz bir kesi ile açın (bkz. Şekil 2B).
3. Karın kas duvarının kalan katmanlarını küçük bir cerrahi makasla 4 - 5 mm lateralden orta hatta sağ kanada kadar açın (bkz. Şekil 2B).
4. İnce bağırsağı sol karın kası duvarının altına geri çekin ve normal tuzlu su ile doyurulmuş 2-3 parça steril gazlı bez kullanarak yerinde tutun.
5. Duodenum kanülünü rehidrasyon solüsyonu ile doldurulmuş bir şırıngaya (örn., 10 ml) takın.
6. Duodenumu, ince bağırsağın parlak pembe (daha fazla kan damarı içeren) bölümü olarak tanımlayın, bu da hafifçe aşağı doğru çekildiğinde mideyi ortaya çıkarır.
7. Steril bir 23 G iğne kullanarak mide ve duodenumun (pilor) birleştiği yerin yaklaşık 2 cm altında duodenumda küçük bir delik açın.
8. Duodenal kanülün J şeklindeki kancalı ucunu delinme deliğinden geçirin. Bir damla siyanoakrilat tutkalı ile yerine sabitleyin.
9. Kanülü bir infüzyon pompasına yüklenen rehidrasyon şırıngasına takarak sıçanın hidrasyonunu başlatın. Literatüre göre, rehidrasyon oranları 0.5 - 3 ml / saat arasında değişmektedir.
10. Lenf ve duodenum kanülasyonu tamamlandıktan sonra, karın kas duvarındaki kesi dikişlerle kapatın. Daha sonra kesi kenarı boyunca birkaç damla doku yapıştırıcısı (siyanoakrilat) uygulayarak ve kesiğin her iki tarafındaki cildi birbirine sıkıştırarak cilt kesisini kapatın.

Sonuçlar

Şekil 1. Bir karotis arter veya lenf kanülünün eğimli ucunun şeklinin ve bir duodenal kanülün J şeklindeki eğimli ucunun şeklinin şematik gösterimi.

Şekil 2. (A) lenf kanalını kanüle etmek için traş edilen karın, (B) lenf kanalına ulaşmak için orta hatta...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Steril tuzlu su	Baxter sağlık hizmetleri	AHB 1307	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Baxter 100 ml tuzlu su torbaları, 50'lik kutu
Suda %70 etanol	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
Klorheksidin glukonat çözeltisi (Microshield 4)	Livingstone Uluslararası	JJ60243L	Herhangi bir marka kullanılabilir. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Betadine çözeltisi	Livingstone Uluslararası	BU0510	Herhangi bir marka kullanılabilir. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Ilium Ketamil (Ketamin 100 mg / ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Ksilazin 100 mg / ml)	PROVET VICTORIA	TRO-3828 Serisi	http://www.provet.com.au/
ACP 10 Enjeksiyonu (Asepromazin 10 mg / ml)	PROVET VICTORIA	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Heparin (35 mL'de 35000IU)	Sigma İlaç	337220	http://sigmaco.com.au/
Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) disodyum tuzu dihidrat	Sigma-Aldrich	E1644	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, Sigma'dan EDTA'nın disodyum tuzudur.
Polietilen (PE) kanül dış çap 0,96 mm x iç çap 0,58 mm	Mikrotüp uzantıları	PE8050	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek PE boru 0.8x0.5 mm, 30 m
Polietilen (PE) kanül dış çap 0,8 mm x iç 0,5 mm	Mikrotüp uzantıları	PE9658	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek PE boru 0.96x0.58 mm, 30 m
cetvel	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
işaretleyiciler	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
çakmak	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
Siyanoakrilat yapıştırıcı	herhangi		Herhangi bir marka kullanılabilir
23 gauge iğne	Livingstone Uluslararası	DN23GX0.75LV	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Livingstone Tek Kullanımlık İğne, Steril, 23GX0.75inch, 100/BOX'tır. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0,75LV
25 gauge iğne	Livingstone Uluslararası	DN25GX1.0LV	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Livingstone Tek Kullanımlık İğne, Steril, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1.0LV
1 ml şırınga	Livingstone Uluslararası	T3SS01TA	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Terumo şırınga 1 ml Slip Tuberculin 100 / Box'tır. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
10 ml şırınga	Livingstone Uluslararası	T3SS10SA	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Terumo şırınga 10 ml Slip 100 / Box'tır. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Gazlı bez çubukları	Livingstone Uluslararası	GSC075	Herhangi bir marka kullanılabilir ve istenen boyutta kesilebilir. Buradaki örnek gazlı bez pamuk dolgulu 7.5x7.5 cm, 8 katlıdır. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Isıtma yastığı	Ratek	WT1 (İngilizce	Sıcaklığı 37C'de tutan herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Ratek ısıtma tepsisidir.
Cerrahi ışık	Harvard Aygıtı	72-0215 ile 72-0267	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek Harvard cihazı V-Lux 1000 Soğuk Işık Kaynağı, Çatallı Deveboynu Işık Kılavuzu, Siyah, 4,7 mm fiber çapı (her bir kol). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
Cerrahi mikroskop	Zeiss	495005-0014-000	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, Stand S Çift Spot ve KL 300 LED'li Zeiss Stereomikroskop Stemi 2000-C'dir. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
İpek sütür	Livingstone Uluslararası	DTSK163019F4	Herhangi bir marka kullanılabilir. Örnek burada * Bu öğeyi arkadaşıma e-posta ile gönder 3/8 Daire Ters Kesim İpek Sütür 3/0 İplik 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
Neşter bıçakları	Güzel Bilim Araçları (FST)	10020-00	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek FST Neşter Bıçağı #20'dir. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Neşter sapı	Güzel Bilim Araçları (FST)	10004-13	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek FST Neşter Kolu #4'tür. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Küçük cerrahi makas	Güzel Bilim Araçları (FST)	14060-09	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek FST İnce Makas, 9 cm, 21 mm kesme kenarlı, keskin, düz. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Tırtıklı kavisli uçlu forseps	Güzel Bilim Araçları (FST)	11001-13	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, kavisli 2.8x1.4 mm uçlu FST 13 cm standart desen forsepstir. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x Kanama Durdurucu	Güzel Bilim Araçları (FST)	13010-12	Herhangi bir marka kullanılabilir. Tüm operatörler kanama durdurucuları kullanmaz. Buradaki örnek, 20 mm uzunluk x 1.3 mm genişlik tırtıklı, düz uçlu FST 12 cm Mikro Sivrisinek Kanama Durduruculardır. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x Sütür iğnesi tutucu	Güzel Bilim Araçları (FST)	12001-13	Herhangi bir marka kullanılabilir. Buradaki örnek, 16 mm uzunluk x 1,9 mm genişlik ucuna sahip FST 13cm Hasley İğne Tutucudur. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

Serisi Serisi Gazetesi Serisi Serisi Serisi Serisi Belediyesi )